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花落已季末

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒切不开 已有4人参与

内切酶用的XbaI,位于我的目的基因两边,测序结果表明酶切位点序列正确,两边也没有甲基化位点,想用XbaI进行酶切,但调整质粒浓度,酶量,反应体系,酶切时间,更换新的内切酶,始终切不开,求教各位高手

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流年似水,看不透的是红尘中镜花水月;往事如烟,挥不去的是岁月荏苒一过往;待得繁华落尽,只余回忆。
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花落已季末

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tfytli at 2016-05-29 23:07:32
你用的哪个公司的酶?多大的体系?质粒及酶的用量是多少?这些细节要说清楚我们才好判断。这个酶我常用,没有切不开的情况,算是比较常用的酶。

酶用过全式金的,也用过TAKARA的,体系是20ul,15ul质粒,2ul10╳buffer,3ul的酶

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流年似水,看不透的是红尘中镜花水月;往事如烟,挥不去的是岁月荏苒一过往;待得繁华落尽,只余回忆。
3楼2016-05-30 07:52:44
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tfytli

金虫 (职业作家)

你用的哪个公司的酶?多大的体系?质粒及酶的用量是多少?这些细节要说清楚我们才好判断。这个酶我常用,没有切不开的情况,算是比较常用的酶。

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道,外加一点数据。
2楼2016-05-29 23:07:32
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tfytli

金虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 花落已季末 at 2016-05-30 07:52:44
酶用过全式金的,也用过TAKARA的,体系是20ul,15ul质粒,2ul10╳buffer,3ul的酶
...

你用同样的酶量和质粒量,换50微升体系试试,切的时间尽量长一点。用的酶量不应超过体系的十分之一,会影响酶切效果。

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道,外加一点数据。
4楼2016-05-30 09:15:54
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lx910615

新虫 (小有名气)

我感觉有可能没有找到最佳条件

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5楼2016-05-31 07:17:23
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