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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒切不开
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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主试用了两个品牌的酶切，估计酶出问题的可能性较小，很可能是质粒的原因，你的质粒已经测序验证了这上面连的就是你的目的基因序列了吗？也确定有这两个相同的酶切位点了吗？没有的话先确定好。还有想问一下楼主为什么要使用两个相同的酶切位点，分子克隆书上的经典双酶切体系是有其道理的，相比单酶切的两个酶切位点有优势。
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11楼2016-05-31 09:48:22
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star013

新虫 (知名作家)
我们可以帮您做wb，我们专门做生物技术一站式服务

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12楼2016-05-31 11:59:26
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skk910416

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 花落已季末 at 2016-05-30 07:52:44
酶用过全式金的，也用过TAKARA的，体系是20ul，15ul质粒，2ul10╳buffer，3ul的酶
...

应该是质粒加多了  1ul足够了

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kai
13楼2016-05-31 15:53:07
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15113546664

新虫 (初入文坛)
换种内切酶啰

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14楼2016-05-31 16:37:25
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221345

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒提取后跑胶看过吗？或者测过浓度吗？最好测一下，再做酶切，如果酶没失活的话，而且质粒提取正常（一般试剂盒提取出来浓度很大的），感觉你的体系有问题，质粒貌似有些多了，你看下这个酶随着反应时间增长，酶活变化大不大
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15楼2016-05-31 22:26:47
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vjebejw570
祝福
16楼2016-06-01 11:12:24
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bzzwx70
祝福
17楼2016-06-01 20:38:14
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