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zhoubin0823

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
楼主试用了两个品牌的酶切,估计酶出问题的可能性较小,很可能是质粒的原因,你的质粒已经测序验证了这上面连的就是你的目的基因序列了吗?也确定有这两个相同的酶切位点了吗?没有的话先确定好。还有想问一下楼主为什么要使用两个相同的酶切位点,分子克隆书上的经典双酶切体系是有其道理的,相比单酶切的两个酶切位点有优势。
11楼2016-05-31 09:48:22
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star013

新虫 (知名作家)


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12楼2016-05-31 11:59:26
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skk910416

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 花落已季末 at 2016-05-30 07:52:44
酶用过全式金的,也用过TAKARA的,体系是20ul,15ul质粒,2ul10╳buffer,3ul的酶
...

应该是质粒加多了  1ul足够了

发自小木虫Android客户端
kai
13楼2016-05-31 15:53:07
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15113546664

新虫 (初入文坛)

14楼2016-05-31 16:37:25
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221345

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
质粒提取后跑胶看过吗?或者测过浓度吗?最好测一下,再做酶切,如果酶没失活的话,而且质粒提取正常(一般试剂盒提取出来浓度很大的),感觉你的体系有问题,质粒貌似有些多了,你看下这个酶随着反应时间增长,酶活变化大不大
15楼2016-05-31 22:26:47
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祝福
16楼2016-06-01 11:12:24
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祝福
17楼2016-06-01 20:38:14
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