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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 质粒切不开
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花落已季末

银虫 (小有名气)

[求助] 质粒切不开 已有4人参与

内切酶用的XbaI，位于我的目的基因两边，测序结果表明酶切位点序列正确，两边也没有甲基化位点，想用XbaI进行酶切，但调整质粒浓度，酶量，反应体系，酶切时间，更换新的内切酶，始终切不开，求教各位高手

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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
1楼 2016-05-29 22:48:32
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花落已季末

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tfytli at 2016-05-30 09:15:54
你用同样的酶量和质粒量，换50微升体系试试，切的时间尽量长一点。用的酶量不应超过体系的十分之一，会影响酶切效果。
...

按照你说的试了试，依旧没有切开

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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
9楼2016-05-31 08:45:38
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tfytli

金虫 (职业作家)
你用的哪个公司的酶？多大的体系？质粒及酶的用量是多少？这些细节要说清楚我们才好判断。这个酶我常用，没有切不开的情况，算是比较常用的酶。

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
2楼2016-05-29 23:07:32
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花落已季末

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by tfytli at 2016-05-29 23:07:32
你用的哪个公司的酶？多大的体系？质粒及酶的用量是多少？这些细节要说清楚我们才好判断。这个酶我常用，没有切不开的情况，算是比较常用的酶。

酶用过全式金的，也用过TAKARA的，体系是20ul，15ul质粒，2ul10╳buffer，3ul的酶

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流年似水，看不透的是红尘中镜花水月；往事如烟，挥不去的是岁月荏苒一过往；待得繁华落尽，只余回忆。
3楼2016-05-30 07:52:44
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tfytli

金虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 花落已季末 at 2016-05-30 07:52:44
酶用过全式金的，也用过TAKARA的，体系是20ul，15ul质粒，2ul10╳buffer，3ul的酶
...

你用同样的酶量和质粒量，换50微升体系试试，切的时间尽量长一点。用的酶量不应超过体系的十分之一，会影响酶切效果。

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
4楼2016-05-30 09:15:54
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