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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用菌液摇提取质粒浓度很低！
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)

[求助] 用菌液摇提取质粒浓度很低！ 已有5人参与

试了好几次。菌液PCR有结果，测序也对。然后提取质粒浓度很低不到100，有时候不到50，同一批提的其他的就很高。
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1楼 2016-05-27 08:56:32
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

tfytli

金虫 (职业作家)
我们用的omg的中提试剂盒，摇菌16个小时，15ml菌液，提出来一般有1微克每毫升，你这种情况可能是引入了杂菌，建议用提出来的质粒重新转化。

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最令人信服的话莫过于一本正经的胡说八道，外加一点数据。
14楼2016-05-29 23:12:13
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普通回帖

丫头的格格巫

新虫 (初入文坛)
质粒本来的拷贝不高？试剂盒提么？

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2楼2016-05-27 09:02:03
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原野漫漫

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2016-05-27 09:02:07
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030Selma

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰·手有余香，谢谢你的理解与支持。myprayer祝您科研顺利，文章多多。 2016-05-27 22:35:11
yangyang1991: 金币+1, ★有帮助 2016-05-28 18:44:06
我们的试剂盒小提的，试剂盒写每次有1-40ug，之前老师提取的是80ng per ul, 我昨天也提了一个，比80多一点点快90的样子，一共50ul洗脱，已经达到试剂盒的高限了。也没有你说的那么严重，如果浓度不是很高的话。
序列验证正确，要不就是你的菌液浓度不太够，这个可以多次收集菌体后再提。要不就是浓度够了，但质粒拷贝数不高，这个也得多收集菌体富集

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4楼2016-05-27 09:24:30
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Liumengya

木虫 (正式写手)
如果浓度不够，多提几管，然后混在一起放在冷冻干燥冻干后再稀释成你要的浓度

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5楼2016-05-27 22:03:15
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 丫头的格格巫 at 2016-05-27 09:02:03
质粒本来的拷贝不高？试剂盒提么？

试剂盒，生工的

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6楼2016-05-28 18:42:12
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yangyang1991

铁杆木虫 (著名写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 原野漫漫 at 2016-05-27 09:02:07
复制原点是不是本身就不是高拷贝质粒

因为之前做过，提的浓度挺高的。最近用同样的原始菌液扩大培养都是那样

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7楼2016-05-28 18:43:16
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川大太行

金虫 (正式写手)
你用多少体积的菌液提的质粒？

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不惧不惑向阳而生
8楼2016-05-28 23:56:54
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werq63

金虫 (著名写手)
那就在转化吧

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9楼2016-05-29 08:38:46
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397608492

新虫 (小有名气)
你是什么宿主，如果是表达宿主的话本身就不会有太高拷贝数的

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10楼2016-05-29 09:04:16
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