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何子919

银虫 (小有名气)

[求助] 组氨酸标签蛋白纯化 已有1人参与

虫友们,关于使用镍柱纯化组氨酸标签蛋白,在配置结合缓冲液和洗脱缓冲液时,有的仅使用磷酸钠,有的使用的是磷酸氢二钠,还有的用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。配方很繁杂,不知道哪种更标准。望各位大神指点。
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气

常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH

其他用法,恕我无知,没有见过.......
Let God do with it as He wills
2楼2016-05-17 20:01:50
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
何子919: 金币+15, ★★★很有帮助, 非常感谢,学习了。 2016-05-17 21:53:06
这个没有什么更标准。根据你的蛋白性质而定的。比如有的蛋白在酸性下降解或不易洗脱,就要偏碱些,极端的,就像你说的,只用Na2HPO4。有些蛋白需要在一定的盐浓度下才有活性,所以就加些NaCl。有时为了使蛋白纯度更高,在上柱前在样品中加低浓度咪唑,使杂质不易结合。等等,都是要摸条件的。
3楼2016-05-17 20:27:27
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何子919

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-17 20:01:50
常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH

其他用法,恕我无知,没有见过.......

非常感谢
4楼2016-05-17 21:52:17
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