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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 组氨酸标签蛋白纯化
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何子919

银虫 (小有名气)

[求助] 组氨酸标签蛋白纯化 已有1人参与

虫友们，关于使用镍柱纯化组氨酸标签蛋白，在配置结合缓冲液和洗脱缓冲液时，有的仅使用磷酸钠，有的使用的是磷酸氢二钠，还有的用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。配方很繁杂，不知道哪种更标准。望各位大神指点。
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1楼 2016-05-17 17:50:58
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atlanticwi

金虫 (正式写手)

琴美喜欢发呆 不喜欢发脾气
常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH

其他用法，恕我无知，没有见过.......
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Let God do with it as He wills
2楼2016-05-17 20:01:50
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kaobo2012

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
何子919: 金币+15, ★★★很有帮助, 非常感谢，学习了。 2016-05-17 21:53:06
这个没有什么更标准。根据你的蛋白性质而定的。比如有的蛋白在酸性下降解或不易洗脱，就要偏碱些，极端的，就像你说的，只用Na2HPO4。有些蛋白需要在一定的盐浓度下才有活性，所以就加些NaCl。有时为了使蛋白纯度更高，在上柱前在样品中加低浓度咪唑，使杂质不易结合。等等，都是要摸条件的。
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3楼2016-05-17 20:27:27
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何子919

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by atlanticwi at 2016-05-17 20:01:50
常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH

其他用法，恕我无知，没有见过.......

非常感谢
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4楼2016-05-17 21:52:17
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