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组氨酸标签蛋白纯化
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何子919
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组氨酸标签蛋白纯化
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虫友们,关于使用镍柱纯化组氨酸标签蛋白,在配置结合缓冲液和洗脱缓冲液时,有的仅使用磷酸钠,有的使用的是磷酸氢二钠,还有的用磷酸氢二钠和磷酸二氢钠。配方很繁杂,不知道哪种更标准。望各位大神指点。
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2016-05-17 17:50:58
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常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH
其他用法,恕我无知,没有见过.......
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2楼
2016-05-17 20:01:50
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何子919: 金币+15,
★★★
很有帮助, 非常感谢,学习了。
2016-05-17 21:53:06
这个没有什么更标准。根据你的蛋白性质而定的。比如有的蛋白在酸性下降解或不易洗脱,就要偏碱些,极端的,就像你说的,只用Na2HPO4。有些蛋白需要在一定的盐浓度下才有活性,所以就加些NaCl。有时为了使蛋白纯度更高,在上柱前在样品中加低浓度咪唑,使杂质不易结合。等等,都是要摸条件的。
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3楼
2016-05-17 20:27:27
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何子919
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2楼
:
Originally posted by
atlanticwi
at 2016-05-17 20:01:50
常规的缓冲液由弱酸及其共轭碱组成
标准的PBS也符合这个方式。
所以是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠相互调整比例以达到所需pH
其他用法,恕我无知,没有见过.......
非常感谢
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4楼
2016-05-17 21:52:17
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