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莫落

木虫 (正式写手)

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专业: 理论和计算化学

[求助] 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白已有4人参与

载体是pET28,使用的菌种是BL21-DE3。加入IPTG诱导表达以后，收集的菌种呈现白色，和未诱导的黄色呈鲜明对比。然而要表达的蛋白是没有颜色的膜蛋白。表达之前提过质粒酶切是对的，当然构建载体时测序也是对的。挂Ni2+柱后洗脱没有得到蛋白，求大神@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw

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1楼 2016-05-13 11:56:33

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qufeng1991

新虫 (初入文坛)

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专业: 生物大分子结构与功能

我在想是不是detergent没有选对？因为我的蛋白质也是膜蛋白，iptg诱导后也会有白色。我第一次纯化的时候洗脱液里面也没有目的蛋白，后来发现是column的binding affinity不够高，换了新的nickel beads就成功了，产率也很高。对于culture变白，我一直觉得是因为细胞数增多。因为我有一个功能实验需要od18 每次这个时候culture就是完全的乳白色。

发自小木虫IOS客户端