应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白
201/2返回列表12下一页
查看: 4756  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

莫落

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白 已有4人参与

载体是pET28,使用的菌种是BL21-DE3。加入IPTG诱导表达以后，收集的菌种呈现白色，和未诱导的黄色呈鲜明对比。然而要表达的蛋白是没有颜色的膜蛋白。表达之前提过质粒酶切是对的，当然构建载体时测序也是对的。挂Ni2+柱后洗脱没有得到蛋白，求大神@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-05-13 11:56:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

宁静致远131

金虫 (正式写手)
有可能是包涵体，其现象包括:菌体发白，沉淀偏多，可以取一个离心后的沉淀样，跑SDS-PAGE看看

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
天道酬勤
8楼2016-05-14 07:50:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

903770076

新虫 (小有名气)
实验不成功，或者是培养的时间不够，没有出现颜色上的差异

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-05-13 11:58:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 903770076 at 2016-05-13 11:58:55
实验不成功，或者是培养的时间不够，没有出现颜色上的差异

大哥你看清楚再回复好吗？
赞一下 回复此楼
3楼2016-05-13 12:03:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

903770076

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫落 at 2016-05-13 12:03:10
大哥你看清楚再回复好吗？...

好吧，看错了！

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2016-05-13 12:12:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangbing234

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了，所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌，跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达，并确认蛋白表达部位，如果在上清中表达了，你的目的蛋白未纯化出来，那你需要优化你的纯化缓冲液。
3、如果表达的蛋白是包涵体，那么你需要进行包涵体纯化，然后再对包涵体进行复性。
赞一下 回复此楼
5楼2016-05-13 13:19:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

莫落

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangbing234 at 2016-05-13 13:19:31
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了，所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌，跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达，并确认蛋白表达部位，如果在上清中表达了，你的目的蛋白未纯化出来，那你需要优化你的纯化缓 ...

你好！谢谢你的回答。污染的可能性应该不大，因为没有诱导的颜色是正常的，而两个都是来源一个克隆，二次接种才分开的。
另外，形成包涵体能使菌体颜色变白吗？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-05-13 14:11:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

johnny001

木虫 (小有名气)
检测有没有活性，若没有考虑是否移码

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
装B遭雷劈
7楼2016-05-14 07:48:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

加菲的树袋熊

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2016-05-14 08:07:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

i生物

新虫 (小有名气)
菌体发白，很大可能是蛋白为包涵体，

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
10楼2016-05-14 10:51:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 莫落 的主题更新
201/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854AI CV方向招收调剂 +3 章小鱼567 2026-03-23 3/150 2026-03-24 20:25 by 汪！？！
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-24 5/250 2026-03-24 15:46 by 星空星月
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +5 kotoko_ik 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:29 by 学术搬砖er
[考研] 求调剂 +7 十三加油 2026-03-21 7/350 2026-03-23 23:48 by 热情沙漠
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 269求调剂 +4 我想读研11 2026-03-23 4/200 2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 289材料与化工（085600）B区求调剂 +3 这么名字咋样 2026-03-22 4/200 2026-03-22 17:56 by 云民大李老师
[考研] 289求调剂 +7 怀瑾握瑜l 2026-03-20 7/350 2026-03-22 15:57 by ColorlessPI
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 一志愿深大，0703化学，总分302，求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 求助 +5 梦里的无言 2026-03-21 6/300 2026-03-21 17:51 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 324分 085600材料化工求调剂 +4 llllkkkhh 2026-03-18 4/200 2026-03-21 01:24 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中科技大学，080502，354分求调剂 +5 守候夕阳CF 2026-03-18 5/250 2026-03-21 01:06 by JourneyLucky
[考研] 一志愿 西北大学 ，070300化学学硕，总分287，双非一本，求调剂。 +3 晨昏线与星海 2026-03-18 3/150 2026-03-21 00:46 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭