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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白
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潜度幻想

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人感觉是OD没达到0.6 你就诱导了。我出现这种情况 。
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11楼2016-05-14 12:11:48
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sonhey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫落 at 2016-05-13 14:11:07
你好！谢谢你的回答。污染的可能性应该不大，因为没有诱导的颜色是正常的，而两个都是来源一个克隆，二次接种才分开的。
另外，形成包涵体能使菌体颜色变白吗？
...

为什么不按照，虫友意见检测一下呢，白色的话，是很有可能是包涵体的

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且行且珍惜
12楼2016-05-16 01:44:40
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duanjifu520

铜虫 (正式写手)
一楼是正解 直接跑个全细胞的sds胶就知道了  很有可能是包涵体 还有你的本来就是膜蛋白

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13楼2016-05-16 03:17:38
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qufeng1991

新虫 (初入文坛)
我在想是不是detergent没有选对？因为我的蛋白质也是膜蛋白，iptg诱导后也会有白色。我第一次纯化的时候洗脱液里面也没有目的蛋白，后来发现是column的binding affinity不够高，换了新的nickel beads就成功了，产率也很高。对于culture变白，我一直觉得是因为细胞数增多。因为我有一个功能实验需要od18 每次这个时候culture就是完全的乳白色。

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14楼2016-05-16 06:24:04
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123n

木虫 (正式写手)
那是蛋白表达多的缘故，以前遇到过，均能正常表达

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15楼2016-05-16 06:51:36
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zhangbing234

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 莫落 at 2016-05-13 14:11:07
你好！谢谢你的回答。污染的可能性应该不大，因为没有诱导的颜色是正常的，而两个都是来源一个克隆，二次接种才分开的。
另外，形成包涵体能使菌体颜色变白吗？
...

你好，包涵体是大肠杆菌体内的一种未折叠完毕的颗粒蛋白，量再大也不会改变菌体的颜色，建议你重新进行发酵诱导，控制微生物的污染，不要被杂菌污染了。
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16楼2016-05-16 13:21:56
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jack081

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

这种现象很普遍，一般包涵体很多的蛋白， 菌体会有发白的现象。具体原因不太清楚！而且膜蛋白在大肠杆菌表达宿主很多都是包涵体。
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追求卓越、
17楼2016-05-16 14:10:58
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Wkoakuma

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by johnny001 at 2016-05-14 07:48:28
检测有没有活性，若没有考虑是否移码

同求问题，我的就是跑sds蛋白条带明显，可是怎么都测不出活性，该怎么继续做了？
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18楼2016-11-16 09:32:57
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小牧童嘻嘻

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangbing234 at 2016-05-13 13:19:31
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了，所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌，跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达，并确认蛋白表达部位，如果在上清中表达了，你的目的蛋白未纯化出来，那你需要优化你的纯化缓 ...

想问一下，包涵体复性你有做过吗？之前查了，感觉步骤好多，很麻烦，本来蛋白就容易失活，折腾那么些步骤，还能有活性吗？
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如果不知道未来是什么样的，勇敢向前走就行了
19楼2016-11-29 15:44:16
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郭高杰

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by johnny001 at 2016-05-14 07:48:28
检测有没有活性，若没有考虑是否移码

大肠表达的蛋白，没有活性，没有移码突变，如果说是折叠错误，怎么办？（已经低温15度，0.2mM IPTG诱导）
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20楼2018-12-25 14:54:35
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