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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 分子生理 » 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白
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莫落

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色，蛋白为没有颜色的膜蛋白 已有4人参与

载体是pET28,使用的菌种是BL21-DE3。加入IPTG诱导表达以后，收集的菌种呈现白色，和未诱导的黄色呈鲜明对比。然而要表达的蛋白是没有颜色的膜蛋白。表达之前提过质粒酶切是对的，当然构建载体时测序也是对的。挂Ni2+柱后洗脱没有得到蛋白，求大神@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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1楼 2016-05-13 11:56:33
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宁静致远131

金虫 (正式写手)
有可能是包涵体，其现象包括:菌体发白，沉淀偏多，可以取一个离心后的沉淀样，跑SDS-PAGE看看

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天道酬勤
8楼2016-05-14 07:50:04
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普通回帖

903770076

新虫 (小有名气)
实验不成功，或者是培养的时间不够，没有出现颜色上的差异

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2楼2016-05-13 11:58:55
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莫落

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 903770076 at 2016-05-13 11:58:55
实验不成功，或者是培养的时间不够，没有出现颜色上的差异

大哥你看清楚再回复好吗？
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3楼2016-05-13 12:03:10
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903770076

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫落 at 2016-05-13 12:03:10
大哥你看清楚再回复好吗？...

好吧，看错了！

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4楼2016-05-13 12:12:12
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zhangbing234

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了，所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌，跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达，并确认蛋白表达部位，如果在上清中表达了，你的目的蛋白未纯化出来，那你需要优化你的纯化缓冲液。
3、如果表达的蛋白是包涵体，那么你需要进行包涵体纯化，然后再对包涵体进行复性。
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5楼2016-05-13 13:19:31
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莫落

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangbing234 at 2016-05-13 13:19:31
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了，所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌，跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达，并确认蛋白表达部位，如果在上清中表达了，你的目的蛋白未纯化出来，那你需要优化你的纯化缓 ...

你好！谢谢你的回答。污染的可能性应该不大，因为没有诱导的颜色是正常的，而两个都是来源一个克隆，二次接种才分开的。
另外，形成包涵体能使菌体颜色变白吗？

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6楼2016-05-13 14:11:07
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johnny001

木虫 (小有名气)
检测有没有活性，若没有考虑是否移码

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装B遭雷劈
7楼2016-05-14 07:48:28
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加菲的树袋熊

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2016-05-14 08:07:02
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i生物

新虫 (小有名气)
菌体发白，很大可能是蛋白为包涵体，

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10楼2016-05-14 10:51:49
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