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莫落

木虫 (正式写手)

[求助] 大肠杆菌加IPTG诱导表达后收集的菌种呈白色,蛋白为没有颜色的膜蛋白已有4人参与

载体是pET28,使用的菌种是BL21-DE3。加入IPTG诱导表达以后,收集的菌种呈现白色,和未诱导的黄色呈鲜明对比。然而要表达的蛋白是没有颜色的膜蛋白。表达之前提过质粒酶切是对的,当然构建载体时测序也是对的。挂Ni2+柱后洗脱没有得到蛋白,求大神@biostar2009@飞约疯人院@wizardfan@youlinglyw
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宁静致远131

金虫 (正式写手)

有可能是包涵体,其现象包括:菌体发白,沉淀偏多,可以取一个离心后的沉淀样,跑SDS-PAGE看看

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天道酬勤
8楼2016-05-14 07:50:04
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普通回帖

903770076

新虫 (小有名气)

实验不成功,或者是培养的时间不够,没有出现颜色上的差异

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2楼2016-05-13 11:58:55
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莫落

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 903770076 at 2016-05-13 11:58:55
实验不成功,或者是培养的时间不够,没有出现颜色上的差异

大哥你看清楚再回复好吗?
3楼2016-05-13 12:03:10
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903770076

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 莫落 at 2016-05-13 12:03:10
大哥你看清楚再回复好吗?...

好吧,看错了!

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4楼2016-05-13 12:12:12
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zhangbing234

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了,所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌,跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达,并确认蛋白表达部位,如果在上清中表达了,你的目的蛋白未纯化出来,那你需要优化你的纯化缓冲液。
3、如果表达的蛋白是包涵体,那么你需要进行包涵体纯化,然后再对包涵体进行复性。
5楼2016-05-13 13:19:31
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莫落

木虫 (正式写手)

引用回帖:
5楼: Originally posted by zhangbing234 at 2016-05-13 13:19:31
1、多半你的大肠杆菌被杂菌污染了,所以才会出现颜色的变化。
2、如果你的蛋白未染菌,跑SDS-PAGE确认目的蛋白是否表达,并确认蛋白表达部位,如果在上清中表达了,你的目的蛋白未纯化出来,那你需要优化你的纯化缓 ...

你好!谢谢你的回答。污染的可能性应该不大,因为没有诱导的颜色是正常的,而两个都是来源一个克隆,二次接种才分开的。
另外,形成包涵体能使菌体颜色变白吗?

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6楼2016-05-13 14:11:07
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johnny001

木虫 (小有名气)

检测有没有活性,若没有考虑是否移码

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装B遭雷劈
7楼2016-05-14 07:48:28
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加菲的树袋熊

禁虫 (小有名气)

本帖内容被屏蔽

9楼2016-05-14 08:07:02
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i生物

新虫 (小有名气)

菌体发白,很大可能是蛋白为包涵体,

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10楼2016-05-14 10:51:49
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