24小时热门版块排行榜    

查看: 2909  |  回复: 5
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 从这个质粒图上看,想用XbaI做酶切位点的话,设计引物是不是要补两个碱基? 已有2人参与

从这个质粒图上看,想用XbaI做酶切位点的话,设计引物是不是要补两个碱基?

质粒融合表达部分的序列

我想用EcoRI和XbaI做酶切位点
EcoRI是不是需要在我设计的引物的GAATTC后面补一个碱基,再加我的目的基因呢?

还有后面的XbaI,为什么要设计成这个样子,这样的话要想表达出后面的his标签,是不是需要在TCTAGA前面补两个碱基?


但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?所以说到底加不加碱基也搞不懂了···

望了解的朋友赐教!非常感谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?

你师姐是不是也没管EcoRI啊,如果恰巧没遇到突变的终止密码子,那么有可能后面的his-tag还是活的啊。。
3楼2016-05-02 11:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
sdjnyxn123: 金币+100, ★★★★★最佳答案 2016-05-09 09:50:36
EcoRI是不是需要在我设计的引物的GAATTC后面补一个碱基,再加我的目的基因呢?
(是!)
还有后面的XbaI,为什么要设计成这个样子,这样的话要想表达出后面的his标签,是不是需要在TCTAGA前面补两个碱基?
(是!)
2楼2016-05-02 11:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-05-02 11:37:43
但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?

你师姐是不是也没管EcoRI啊,如果恰巧没遇到突变的终止密码子,那么有可能后面的 ...

感谢回答

她用的第一个限制酶是XhoI,然后加了一段就是质粒上面的序列,到多克隆位点前面,也就是质粒图上翻译出的那个Ala(GCA)就加自己的目的基因了

首先我不清楚那个ClaI指着的框,框住6个碱基是啥意思,她这样会不会断开某个表达的序列
单说上游表达应该是没问题

但是下游她也是用的XbaI,没多加碱基,就那么表达的,她现在毕业一年多了也找不到当时测序回来的邮件了,按理说她这样的话后面应该表达不出his标签啊···
4楼2016-05-02 12:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kungfu2016

新虫 (正式写手)

你将XhoI位点前6个碱基到EAEA的序列做引物克隆到的蛋白序列前面,用XhoI和XbaI切连,应该没有问题的

发自小木虫Android客户端
5楼2016-05-03 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +7 布布和一二 2026-08-08 7/350 2026-08-10 10:26 by allmydream
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +7 yufeiwaner 2026-08-09 7/350 2026-08-10 09:08 by zju2000
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 有没有H口的?有收到消息的吗? +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见