24小时热门版块排行榜    

查看: 2918  |  回复: 5

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

[求助] 从这个质粒图上看,想用XbaI做酶切位点的话,设计引物是不是要补两个碱基? 已有2人参与

从这个质粒图上看,想用XbaI做酶切位点的话,设计引物是不是要补两个碱基?

质粒融合表达部分的序列

我想用EcoRI和XbaI做酶切位点
EcoRI是不是需要在我设计的引物的GAATTC后面补一个碱基,再加我的目的基因呢?

还有后面的XbaI,为什么要设计成这个样子,这样的话要想表达出后面的his标签,是不是需要在TCTAGA前面补两个碱基?


但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?所以说到底加不加碱基也搞不懂了···

望了解的朋友赐教!非常感谢
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感谢参与,应助指数 +1
sdjnyxn123: 金币+100, ★★★★★最佳答案 2016-05-09 09:50:36
EcoRI是不是需要在我设计的引物的GAATTC后面补一个碱基,再加我的目的基因呢?
(是!)
还有后面的XbaI,为什么要设计成这个样子,这样的话要想表达出后面的his标签,是不是需要在TCTAGA前面补两个碱基?
(是!)
2楼2016-05-02 11:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?

你师姐是不是也没管EcoRI啊,如果恰巧没遇到突变的终止密码子,那么有可能后面的his-tag还是活的啊。。
3楼2016-05-02 11:37:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdjnyxn123

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2016-05-02 11:37:43
但是我一个师姐完全没管后面的XbaI,直接按照表达的氨基酸设计的引物序列,也就是目的基因是三的倍数
然后过镍柱也纯化出来了?

你师姐是不是也没管EcoRI啊,如果恰巧没遇到突变的终止密码子,那么有可能后面的 ...

感谢回答

她用的第一个限制酶是XhoI,然后加了一段就是质粒上面的序列,到多克隆位点前面,也就是质粒图上翻译出的那个Ala(GCA)就加自己的目的基因了

首先我不清楚那个ClaI指着的框,框住6个碱基是啥意思,她这样会不会断开某个表达的序列
单说上游表达应该是没问题

但是下游她也是用的XbaI,没多加碱基,就那么表达的,她现在毕业一年多了也找不到当时测序回来的邮件了,按理说她这样的话后面应该表达不出his标签啊···
4楼2016-05-02 12:08:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kungfu2016

新虫 (正式写手)

你将XhoI位点前6个碱基到EAEA的序列做引物克隆到的蛋白序列前面,用XhoI和XbaI切连,应该没有问题的

发自小木虫Android客户端
5楼2016-05-03 23:16:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

EcoRI  需要在你设计的引物的GAATTC后面补一个碱基,再加我的目的基因呢?
XbaI  不需要在TCTAGA前面补两个碱基(你只要保证GAATTC后面补一个碱基后,剩下的目的基因序列是3的倍数,我说的不包括酶切位点的序列。因为按照3个密码子翻译为一个蛋白,到XbaI 之前,只要目的基因序列是3的倍数,翻译到XbaI时,正好按照TTT CTA  GAA 的顺序范围,没有出现密码子错位)
6楼2016-05-05 13:57:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sdjnyxn123 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +8 majunge000 2026-08-10 9/450 2026-08-12 22:17 by 虫友是什么虫
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] 好奇怪的filecode +5 布布和一二 2026-08-08 6/300 2026-08-12 16:11 by 云上清扬
[基金申请] 长年满屏的广告,版主太不责任了。基金也等的急 +4 gltch 2026-08-12 4/200 2026-08-12 16:08 by eulota
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +3 布布和一二 2026-08-11 4/200 2026-08-11 15:20 by aasahr
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制,评价高的钱多评价低的钱少,但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
信息提示
请填处理意见