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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 用胶回收试剂盒回收DNA回收效率低
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i760912798

木虫 (正式写手)

[交流] 用胶回收试剂盒回收DNA回收效率低 已有10人参与

多次用胶回收试剂盒回收DNA回收效率低，如何提高回收？

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1楼 2016-04-29 15:09:03
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何子919

银虫 (小有名气)
★
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可以考虑用DNA片段的纯化试剂盒。对于PCR片段我们一般先用PCR纯化试剂盒，酶切后再用胶回收，这样回收率会高一些。
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2楼2016-04-29 15:19:18
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卡维斯

金虫 (正式写手)
★
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在PCR条件已经优化条件下，多扩几管，四五个样放在一个管中回收。或者过柱子时候用四五个样的溶解液
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4楼2016-04-29 21:24:08
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 何子919 at 2016-04-29 15:19:18
可以考虑用DNA片段的纯化试剂盒。对于PCR片段我们一般先用PCR纯化试剂盒，酶切后再用胶回收，这样回收率会高一些。

胶回收后，测浓度A260/280为280.是什么原因，这样的测出的浓度可信吗？

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3楼2016-04-29 15:26:22
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Roylin

新虫 (初入文坛)
★
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提高点样的量，最终加水溶解时可以加入少量的水，分两次过滤

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5楼2016-04-29 23:42:49
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彷徨0713

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可以直接用PCR产物过柱回收，不用跑胶！

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6楼2016-04-30 00:30:13
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Eternity宇

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
7楼2016-04-30 18:55:23
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半仙0356

新虫 (正式写手)
★
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最后洗脱的时候少量多次，多洗几次就好啦～我以前回收底，后来每次加10μL，加三次，哦了

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8楼2016-05-01 06:10:37
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i760912798

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 半仙0356 at 2016-05-01 06:10:37
最后洗脱的时候少量多次，多洗几次就好啦～我以前回收底，后来每次加10μL，加三次，哦了

我是按照说明书上一次用30ul去离子水洗脱的，但每次洗脱回收率都很低，每次10ul，洗脱3次可以将DNA完全洗下来吗？

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9楼2016-05-01 06:42:26
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scofield111

银虫 (正式写手)
★
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注意洗脱，是takara的么？

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10楼2016-05-01 14:38:46
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