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tbdlzf

新虫 (初入文坛)

[求助] 流式细胞仪检测抗体染色细胞 已有1人参与

本人在做AcMNPV病毒感染sf9昆虫细胞实验，加入病毒感染3-10个小时后取样，处理后上流式检测，收集的细胞数是20000个，分析细胞荧光强度分布情况。
细胞样是这样处理的：1200r/min离心5min后用PBS（加0.1%NaN3、3%BSA）清洗、加固定剂、清洗、再加抗体孵育，洗一遍后检测。处理方法都是按说明书来的，可是做了很多遍了，结果都和阴性对照结果没什么差别。求高手指点！（固定剂是life technologies的FIX&PERM，抗体是santa cruz的ACV1-FITC，可以特异结合病毒上的GP64蛋白，检测通道是FL1H）
图中紫色部分是实验组，绿色线条是阴性对照。文献里面两个波峰应该是可以错开的。

流式细胞仪检测抗体染色细胞
IMG_20160421_154037.jpg@gyesang
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1楼 2016-04-22 15:17:45
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tbdlzf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-04-23 08:59:15
我觉得可能是你破膜的问题，你们实验室延续的都是这样的习惯吗？这种方法没问题？？？如果没问题，那问题会不会出现出现在感染效率的地方上...

破膜处理是按试剂说明书做的，而且非破膜组的结果也是这样的。本人是新手，请问您说的感染效率对结果可能造成什么样的影响？是说病毒还没有感染细胞吗？实验室的师兄以前做过检测，病毒完成吸附是很快的。

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5楼2016-04-23 09:44:37
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
tbdlzf: 金币+20, ★有帮助 2016-04-24 11:35:49
本帖内容被屏蔽
2楼2016-04-22 22:33:49
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tbdlzf

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-04-22 22:33:49
那你的抗体结合的东西在胞内？那估计就要按染胞内的方法来吧？可是只看见固定，没见破膜啊，要不然你的抗体怎么进去细胞里面结合抗原。。。。

抗体是结合GP64蛋白的，也就是说理论上胞内和胞外都应该能结合抗体。破膜处理是有的，在固定洗涤后跟抗体一起加的破膜剂。

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3楼2016-04-22 22:53:03
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2016-04-23 08:59:15
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