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tbdlzf

新虫 (初入文坛)

[求助] 流式细胞仪检测抗体染色细胞已有1人参与

本人在做AcMNPV病毒感染sf9昆虫细胞实验,加入病毒感染3-10个小时后取样,处理后上流式检测,收集的细胞数是20000个,分析细胞荧光强度分布情况。
细胞样是这样处理的:1200r/min离心5min后用PBS(加0.1%NaN3、3%BSA)清洗、加固定剂、清洗、再加抗体孵育,洗一遍后检测。处理方法都是按说明书来的,可是做了很多遍了,结果都和阴性对照结果没什么差别。求高手指点!(固定剂是life technologies的FIX&PERM,抗体是santa cruz的ACV1-FITC,可以特异结合病毒上的GP64蛋白,检测通道是FL1H)
图中紫色部分是实验组,绿色线条是阴性对照。文献里面两个波峰应该是可以错开的。

流式细胞仪检测抗体染色细胞
IMG_20160421_154037.jpg@gyesang
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

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感谢参与,应助指数 +1
tbdlzf: 金币+20, 有帮助 2016-04-24 11:35:49
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2楼2016-04-22 22:33:49
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tbdlzf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-04-22 22:33:49
那你的抗体结合的东西在胞内?那估计就要按染胞内的方法来吧?可是只看见固定,没见破膜啊,要不然你的抗体怎么进去细胞里面结合抗原。。。。

抗体是结合GP64蛋白的,也就是说理论上胞内和胞外都应该能结合抗体。破膜处理是有的,在固定洗涤后跟抗体一起加的破膜剂。

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3楼2016-04-22 22:53:03
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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

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4楼2016-04-23 08:59:15
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tbdlzf

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ghqiu09 at 2016-04-23 08:59:15
我觉得可能是你破膜的问题,你们实验室延续的都是这样的习惯吗?这种方法没问题???如果没问题,那问题会不会出现出现在感染效率的地方上...

破膜处理是按试剂说明书做的,而且非破膜组的结果也是这样的。本人是新手,请问您说的感染效率对结果可能造成什么样的影响?是说病毒还没有感染细胞吗?实验室的师兄以前做过检测,病毒完成吸附是很快的。

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5楼2016-04-23 09:44:37
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柚子小姐lu

铜虫 (正式写手)

请问一下 你用流式细胞仪跑出来的图 用什么软件处理的? 我跑的也是这样的曲线图,怎么样才能处理成可以放到文章里面的那种?是什么软件可以处理?谢谢 交流
6楼2016-10-06 21:18:07
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tbdlzf

新虫 (初入文坛)

我放上去的是用自带的分析软件CELL QUEST Pro分析的,放论文上最好是用Flowjo软件做,这个软件正版的要购买,不过好像也有破解版的。

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7楼2016-10-07 09:01:30
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