应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用T4酶做载体自连接，不长克隆，求大家给支招
131/2返回列表12下一页
查看: 2284  |  回复: 12
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
【悬赏金币】回答本帖问题，作者你的蛔虫将赠送您 5 个金币

你的蛔虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 用T4酶做载体自连接，不长克隆，求大家给支招已有1人参与

最近在做质粒构建，目的载体11000bp,目的片段1000bp.之前一直在用TAKARA的in-fusion重组酶连接，无论怎么连都不长菌，后来打算用T4连接，我先把单酶切的载体加T4连接酶做了自连接，看是否长菌，结果这都不长菌，载体自连接体系10ul,载体200ng左右。抗性和感受态都没有问题，做了阳性对照。为什么载体自连接都不长菌，这是不是很诡异，想破了脑袋，也分析不出原因，求各位有经验的虫友们分析原因
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2016-04-18 09:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
增大目标片段的浓度，设个链接梯度，1比1，1比2，1比3，1比4，然后混合后转化试试

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-04-19 20:22:58
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jingyu90217

新虫 (小有名气)
会不会载体就没切开 所以连不上

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-23 01:38:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaodada123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主我也碰到了一样的问题，目的片段和载体T4连接后片段大小在8kb，用乙醇沉淀后电转，始终不长菌！电感受态细胞无问题，质粒单酶切后酶连做电转有菌落生成。实在不知道原因，求楼主赐教，谢谢~
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-17 12:06:43
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
5楼2017-08-17 20:15:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
6楼2017-08-18 01:44:36
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
7楼2017-08-18 16:22:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
8楼2017-08-19 00:55:14
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
9楼2017-08-20 16:01:41
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
10楼2017-08-20 23:44:48
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 你的蛔虫 的主题更新
131/2返回列表12下一页
不应助 确定回帖应助 (注意：应助才可能被奖励，但不允许灌水，必须填写15个字符以上)
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 江南大学到瑞士招聘，称取消非升即走，改预聘+长聘 +23 babu2015 2024-06-18 28/1400 2024-06-22 03:42 by 星火12
[基金申请] 青年和面上，哪个上会难度更大 +11 今晚推荐22 2024-06-21 13/650 2024-06-22 00:25 by duxin_30
[基金申请] 国自然青年基金，1A4B能上会吗？青年和面上的上会标准是一样的吗？ +15 今晚推荐22 2024-06-20 21/1050 2024-06-21 21:23 by 今晚推荐22
[基金申请] 教育部基金 +5 m1393 2024-06-21 5/250 2024-06-21 21:13 by odes
[基金申请] 听大佬说今年信息口本子数量大幅增加？ +8 wutzxt 2024-06-21 9/450 2024-06-21 19:58 by wutzxt
[硕博家园] 怎么带研究生？ +15 豆豆小小2 2024-06-20 15/750 2024-06-21 18:54 by 高材人9527
[有机交流] 怎么萃取出锡盐内包裹的化合物 +4 硕六过 2024-06-19 5/250 2024-06-21 09:50 by 光超嘟嘟
[基金申请] 江苏省333人才工程 出校后被刷的概率大不大？ +4 maxbirdzhang 2024-06-19 5/250 2024-06-21 08:57 by maxbirdzhang
[有机交流] 跑板能跑开，过柱过不纯怎么办 +8 小胡在努力 2024-06-18 10/500 2024-06-21 08:22 by hptianyan
[基金申请] 工材口青年基金上会可能性 +9 今晚推荐22 2024-06-19 11/550 2024-06-20 22:30 by andywei1028
[基金申请] 我标书代码变了 +63 学员NHuqdk 2024-06-16 86/4300 2024-06-20 22:03 by 841790061
[论文投稿] ACS AMI 返回审稿意见，一个大修，两个据稿，编辑给的修改重投 +7 智商已更新 2024-06-19 7/350 2024-06-20 19:54 by kinlin13
[有机交流] 求助 10+5 脂质纳米粒 2024-06-20 6/300 2024-06-20 17:16 by czyzsu
[基金申请] 青年基金会评专家到底是怎么会评的呀？主审专家是不是一般不会改动系统按函评给的顺序 5+4 他山攻玉之石 2024-06-18 18/900 2024-06-20 16:33 by 他山攻玉之石
[基金申请] 太卷了 +14 laoyuefubio 2024-06-17 27/1350 2024-06-20 09:52 by htjwqy
[基金申请] F口信息学部拿面上，大概需要什么样的成果 +7 _奋黎_ 2024-06-16 18/900 2024-06-19 20:02 by _奋黎_
[基金申请] 博后基金刷到的BUG,图片来的更直观 +15 carolloo 2024-06-17 16/800 2024-06-19 09:42 by msjy
[公派出国] CSC德国博后每个月资助多少呀？够用吗 +4 326lhpqk 2024-06-16 7/350 2024-06-19 02:03 by PLHOU
[论文投稿] 投稿求助 10+3 2022_灵魂工程师 2024-06-16 8/400 2024-06-18 12:12 by 投必得科研顾问
[基金申请] 面青地会评时间 +8 tanjydd 2024-06-15 8/400 2024-06-17 17:08 by 小龙虾2008
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭