应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 用T4酶做载体自连接，不长克隆，求大家给支招
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
131/2返回列表12下一页
查看: 2794  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

你的蛔虫

新虫 (初入文坛)

[求助] 用T4酶做载体自连接，不长克隆，求大家给支招 已有1人参与

最近在做质粒构建，目的载体11000bp,目的片段1000bp.之前一直在用TAKARA的in-fusion重组酶连接，无论怎么连都不长菌，后来打算用T4连接，我先把单酶切的载体加T4连接酶做了自连接，看是否长菌，结果这都不长菌，载体自连接体系10ul,载体200ng左右。抗性和感受态都没有问题，做了阳性对照。为什么载体自连接都不长菌，这是不是很诡异，想破了脑袋，也分析不出原因，求各位有经验的虫友们分析原因
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-04-18 09:28:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

梅太奇阿拉干

木虫 (小有名气)
增大目标片段的浓度，设个链接梯度，1比1，1比2，1比3，1比4，然后混合后转化试试

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2016-04-19 20:22:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

jingyu90217

新虫 (小有名气)
会不会载体就没切开 所以连不上

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-04-23 01:38:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yaodada123

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

楼主我也碰到了一样的问题，目的片段和载体T4连接后片段大小在8kb，用乙醇沉淀后电转，始终不长菌！电感受态细胞无问题，质粒单酶切后酶连做电转有菌落生成。实在不知道原因，求楼主赐教，谢谢~
赞一下 回复此楼
4楼2017-08-17 12:06:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
5楼2017-08-17 20:15:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
6楼2017-08-18 01:44:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
7楼2017-08-18 16:22:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
8楼2017-08-19 00:55:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
9楼2017-08-20 16:01:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tewwewc575
10楼2017-08-20 23:44:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 你的蛔虫 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 求调剂 有机化学考研356分 +11 Nadiums 2026-03-25 12/600 2026-03-31 18:24 by oooqiao
[考研] 求调剂：085600材料与化工，考材科基，总分319 +16 678lucky 2026-03-31 19/950 2026-03-31 16:39 by hypershenger
[考研] 理学07化学 303求调剂 +8 睿08 2026-03-27 8/400 2026-03-31 16:31 by 690616278
[考研] 考研材料工程351分调剂 +3 整个好的 2026-03-31 3/150 2026-03-31 16:14 by 今天星期八LQ
[考研] 一志愿085600中科院宁波所276分求调剂 +12 材料学257求调剂 2026-03-28 13/650 2026-03-31 14:30 by 六翼TMR
[考研] 英一数一总分334求调剂 +4 陈阳坤 2026-03-31 4/200 2026-03-31 14:22 by 记事本2026
[考研] 土木304求调剂 +3 顶级擦擦 2026-03-31 3/150 2026-03-31 13:59 by 西京学院招办
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +6 hanamiko 2026-03-30 6/300 2026-03-31 12:19 by 唐沐儿
[考研] 359求调剂 +5 王了个楠 2026-03-25 5/250 2026-03-30 19:36 by 源_2020
[考研] 297求调剂 +17 田洪有 2026-03-26 18/900 2026-03-30 18:32 by nothing投稿中
[考研] 一志愿南开大学0710生物学359求调剂 +5 兔兔兔111223314 2026-03-29 7/350 2026-03-30 18:29 by 兔兔兔111223314
[考研] 环境科学与工程334分求调剂 +6 王一一依依 2026-03-30 8/400 2026-03-30 11:52 by yjolah
[考研] 352分-085602-一志愿985 +5 海纳百川Ly 2026-03-29 5/250 2026-03-29 09:57 by Sjndkwm
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-27 6/300 2026-03-28 14:10 by 唐沐儿
[考研] 295求调剂 +5 1428151015 2026-03-27 6/300 2026-03-28 04:04 by fmesaito
[考研] 330一志愿中国海洋大学 化学工程 085602 有读博意愿 求调剂 +3 wywy.. 2026-03-27 4/200 2026-03-28 03:32 by fmesaito
[考研] 315调剂 +4 0860求调剂 2026-03-26 5/250 2026-03-27 11:23 by wangjy2002
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +6 kongweilin 2026-03-26 8/400 2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +4 钢铁大炮 2026-03-24 4/200 2026-03-26 16:28 by dick_runner
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭