24小时热门版块排行榜    

查看: 13755  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

玉兔Jane

新虫 (小有名气)

[求助] 双荧光素酶报告基因问题 LUC REN 已有1人参与

1个转录因子,1个启动子,想要研究转录因子对启动子的调控。
实验设计:
1、构建转录因子过表达载体,TF
2、构建启动子+LUC载体,p
3、单独的一个载体,REN海肾荧光素酶载体作为内参,ren
4、35sTF+p+ren     35s空载+p+ren    3个载体共转化拟南芥原生质体,使用Promega试剂盒,单管测LUC,REN荧光,不是用的酶标仪。
结果:不同样品之间,海肾荧光素酶REN的值差别挺大,最小的500,最大的10000。空白对照(原生质体没有加质粒,后面步骤一样的),100左右,所以转化是成功了吧。
问题:理论上来说,不同样品之间的REN值应该差不多的啊,感觉操作也没啥问题,差异这么大,可能的原因有哪些?
谢谢啦~
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

央宗兰泽

新虫 (初入文坛)

老师你好,我也在做这方面的实验,我想问一下,这个荧光素酶报告基因的是用什么仪器检测的,可以用酶标仪吗?还是荧光显微镜,如果是荧光显微镜的话,是普通的就可以还是的用倒置的?

发自小木虫Android客户端
8楼2017-02-27 22:07:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

小崔姐姐03

新虫 (初入文坛)

感觉500的是不对的,因为不加质粒的空白对照的值,通常比其它的值小一百倍,才是正确的

发自小木虫IOS客户端
2楼2016-03-26 15:15:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

玉兔Jane

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 小崔姐姐03 at 2016-03-26 15:15:59
感觉500的是不对的,因为不加质粒的空白对照的值,通常比其它的值小一百倍,才是正确的

谢谢!你的实验结果ren值不同样品差异大吗?一百倍的话,按照我的空白100计算的话,所有的结果都是不对的了
因为海肾荧光素酶是作为对照,质粒加的少一些,所以这个值没有很高。
3楼2016-03-26 15:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

拍个黄瓜

新虫 (初入文坛)

质粒间产生cross talk导致,可换成pGl4 Renilla-TK的载体,并对转录因子质粒,Firefly和Renilla质粒做优化

发自小木虫Android客户端
5楼2016-06-14 22:16:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +3 kongweilin 2026-03-26 4/200 2026-03-26 08:26 by kongweilin
[考研] 316求调剂 +9 梁茜雯 2026-03-19 9/450 2026-03-25 23:01 by peike
[考研] 086000生物与医药292求调剂 +4 小小陈小小 2026-03-22 7/350 2026-03-25 19:07 by 星空星月
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 材料学硕333求调剂 +4 北道巷 2026-03-24 4/200 2026-03-25 14:16 by mapenggao
[考研] 求调剂323材料与化工 +4 1124361 2026-03-24 4/200 2026-03-25 11:19 by shulmg
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-24 3/150 2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 材料调剂 +6 匹克i 2026-03-23 6/300 2026-03-24 21:09 by greychen00
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 一志愿山东大学药学学硕求调剂 +3 开开心心没烦恼 2026-03-23 4/200 2026-03-24 00:06 by 开开心心没烦恼
[考研] 336求调剂 +4 收到VS 2026-03-20 4/200 2026-03-23 19:02 by macy2011
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 293求调剂 +3 涛涛Wjt 2026-03-22 5/250 2026-03-22 22:21 by jiangpengfei
[考研] 求调剂院校信息 +6 CX 330 2026-03-21 6/300 2026-03-22 15:25 by 无懈可击111
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +7 Auroracx 2026-03-22 7/350 2026-03-22 12:38 by 素颜倾城1988
[考研] 一志愿深大,0703化学,总分302,求调剂 +4 七月-七七 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:20 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿西南交通 专硕 材料355 本科双非 求调剂 +5 西南交通专材355 2026-03-19 5/250 2026-03-20 21:10 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见