| 查看: 2533 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
CDS序列扩增条带暗，求解，急！急！急！！ 已有2人参与
|
||
|
最近在做基因表达，扩CDS全长, 片段900左右，从CDS序列头尾上设计的引物，用基因组不保险，所以用的Q5高保真酶扩的cDNA，但条带一直都一直不是很亮，RNA反转录成cDNA这一步没问题，都测过浓度的，并且cDNA稀释了50倍扩的。后面要做片段融合，试过切胶回收，PCR产物直接回收浓度都非常低，没法做下一步，怎么破？CDS的GC含量不高，51%，引物Tm值相差大概3度，GC没问题，见下图左边较暗的4条带 1.确定cDNA没问题 2.酶没问题 3.引物的话，是头尾确定的吧 如果是体系的话，退火温度已经调到很低了，从65,63,60都试过，条带也不亮，切胶基本没有，AXYGEN、QUIGEN的都用过，不纯化吧，对后续实验可能会有影响，有人碰到类似的情况吗？？  P60321-222820.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有110人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
12楼2016-03-26 16:54:19
2楼2016-03-23 11:31:04
zhijiangli
金虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1262.2
- 散金: 683
- 红花: 1
- 帖子: 812
- 在线: 196.4小时
- 虫号: 283726
- 注册: 2006-10-08
- 性别: GG
- 专业: 作物杂种优势及其利用
3楼2016-03-23 11:38:14
4楼2016-03-23 12:56:09