24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1684  |  回复: 12
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组时质粒与目的片段连不上!求帮解答~ 已有2人参与

我最近用SphI和KpnI双酶切质粒5400bp和目的片段1431bp,用T4连接酶进行连接,之后转化,板长得很正常,但是菌液PCR时不能P出目的条带,已经重复好几次连接转化了还是不能P出目的条带,是否有什么高见?求解答!谢谢!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔笔小结

新虫 (初入文坛)

重组质粒构建好后,应该做一次酶切,再测序验证。正确后,再转化吧
3楼2016-03-21 20:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小秀子子: 金币+3 2016-03-22 19:33:16
一方面在进行重新处理载体和片段时,建议将上次酶切处理过得载体片段也加入体系再次酶切进行连接转化,这样可以保证最后是有一部分经过两次酶切的,处理应该比较完全。另一方面,做菌液pcr,虽然简便但是常常会有些异常状况,最准确的方法应该是提取质粒做双酶切验证。祝好!

发自小木虫Android客户端
天空才是极限,我有信心飞的更高!
2楼2016-03-21 16:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

star013

新虫 (知名作家)


我们公司可以做克隆转化,便宜

发自小木虫Android客户端
4楼2016-03-22 08:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-21 16:24:30
一方面在进行重新处理载体和片段时,建议将上次酶切处理过得载体片段也加入体系再次酶切进行连接转化,这样可以保证最后是有一部分经过两次酶切的,处理应该比较完全。另一方面,做菌液pcr,虽然简便但是常常会有些 ...

我怕会不能酶切完全因此有一次都切了十几个小时,再连接转化,可是菌液pcr还是没有条带的。
5楼2016-03-22 19:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +7 @MZB382400 2026-03-28 7/350 2026-04-03 18:39 by ls刘帅
[考研] 317分 一志愿南理工材料工程 本科湖工大 求调剂 +14 芋泥小铃铛 2026-03-28 14/700 2026-04-03 15:36 by 晴空210210
[考研] 326分求调剂 +3 于是乎呢 2026-04-01 5/250 2026-04-03 14:23 by 于是乎呢
[考研] 求调剂 +3 usbdndj 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:10 by dxiaoxin
[考研] 366求调剂 +7 sbdnd 2026-04-03 7/350 2026-04-03 12:40 by cymywx
[考研] 建环,能源,土木老师路过看一看!!! +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 286求调剂 +7 Faune 2026-03-30 7/350 2026-04-03 10:14 by linyelide
[考研] 材料调剂 +10 一样YWY 2026-04-02 10/500 2026-04-02 20:58 by dongzh2009
[考研] 264分,求任意工科调剂 +4 zzlqwq 2026-03-29 5/250 2026-04-02 17:17 by 何曾几何
[考研] 272求调剂,接受跨专业调剂! +4 闲鱼卢 2026-03-31 4/200 2026-04-02 11:18 by guyan1000
[考研] 0805求调剂 +8 是水分 2026-03-31 8/400 2026-04-02 10:46 by guanxin1001
[考研] 08工科275求调剂,可跨考。 +5 AaAa7420 2026-03-31 5/250 2026-04-01 15:21 by 159357hjz
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +12 26要上岸 2026-03-28 12/600 2026-04-01 11:10 by chemdavid
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 海纳百川Ly 2026-03-29 6/300 2026-03-31 21:06 by yuq
[考研] 一志愿浙江大学工科动力工程370,数一121,专业课135,现在能去哪里 +3 080700调剂 2026-03-30 4/200 2026-03-31 12:00 by KLMY666
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 08工科求调剂286 +5 tgs_001 2026-03-28 5/250 2026-03-31 08:18 by 一只好果子?
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 一志愿南京航空航天大学材料学硕求调剂 +3 @taotao 2026-03-28 3/150 2026-03-28 10:26 by JourneyLucky
[考研] 085405 考的11408求各位老师带走 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 09:19 by 乐呵呵的追梦人
信息提示
请填处理意见