应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组时质粒与目的片段连不上！求帮解答~
131/2返回列表12下一页
查看: 1631  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

小秀子子

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组时质粒与目的片段连不上！求帮解答~ 已有2人参与

我最近用SphI和KpnI双酶切质粒5400bp和目的片段1431bp，用T4连接酶进行连接，之后转化，板长得很正常，但是菌液PCR时不能P出目的条带，已经重复好几次连接转化了还是不能P出目的条带，是否有什么高见？求解答！谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-03-21 15:42:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小秀子子: 金币+3 2016-03-22 19:33:16
一方面在进行重新处理载体和片段时，建议将上次酶切处理过得载体片段也加入体系再次酶切进行连接转化，这样可以保证最后是有一部分经过两次酶切的，处理应该比较完全。另一方面，做菌液pcr，虽然简便但是常常会有些异常状况，最准确的方法应该是提取质粒做双酶切验证。祝好！

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
2楼2016-03-21 16:24:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

笔笔小结

新虫 (初入文坛)
重组质粒构建好后，应该做一次酶切，再测序验证。正确后，再转化吧
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2016-03-21 20:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

star013

新虫 (知名作家)
我们公司可以做克隆转化，便宜

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
4楼2016-03-22 08:17:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-21 16:24:30
一方面在进行重新处理载体和片段时，建议将上次酶切处理过得载体片段也加入体系再次酶切进行连接转化，这样可以保证最后是有一部分经过两次酶切的，处理应该比较完全。另一方面，做菌液pcr，虽然简便但是常常会有些 ...

我怕会不能酶切完全因此有一次都切了十几个小时，再连接转化，可是菌液pcr还是没有条带的。
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-22 19:32:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by star013 at 2016-03-22 08:17:24
我们公司可以做克隆转化，便宜

我们导师让自己做
赞一下 回复此楼
6楼2016-03-22 19:36:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

原海亮

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 小秀子子 at 2016-03-22 19:32:59
我怕会不能酶切完全因此有一次都切了十几个小时，再连接转化，可是菌液pcr还是没有条带的。...

额，十几个小时有点过了，不过还是建议你提质粒酶切，菌液pcr做初筛方便，但是会有扩不出来，而酶切验证是正确的

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
天空才是极限，我有信心飞的更高！
7楼2016-03-22 19:38:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wj2423311236

银虫 (小有名气)
你做菌液pcr时挑了几个菌落？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
8楼2016-03-22 19:44:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 原海亮 at 2016-03-22 19:38:05
额，十几个小时有点过了，不过还是建议你提质粒酶切，菌液pcr做初筛方便，但是会有扩不出来，而酶切验证是正确的
...

前面也尝试过将能P出特别淡的菌液抽质粒酶切，但酶切验证没连上
赞一下 回复此楼
9楼2016-03-23 13:50:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小秀子子

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by wj2423311236 at 2016-03-22 19:44:23
你做菌液pcr时挑了几个菌落？

一个板都是挑十个以上的
赞一下 回复此楼
10楼2016-03-23 13:52:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 小秀子子 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 材料工程274求调剂 +3 Lilithan 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:58 by ms629
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 291分工科求调剂 +8 science饿饿 2026-03-01 9/450 2026-03-01 14:22 by Ducount.Y
[考研] 284求调剂 +6 天下熯 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:19 by Ducount.Y
[考研] 0856材料求调剂 +3 麻辣鱿鱼 2026-02-28 3/150 2026-03-01 14:06 by yc258
[考研] 化工299分求调剂 一志愿985落榜 +4 嘻嘻(*^ω^*) 2026-03-01 4/200 2026-03-01 13:15 by wang_dand
[考研] 0856材料专业298分有科研经历 硕士研究生调剂自荐信 +6 zyf上岸 2026-03-01 6/300 2026-03-01 12:43 by liqiongjy
[考研] 272求调剂 +5 材紫有化 2026-02-28 5/250 2026-03-01 11:51 by gaoxiaoniuma
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 311求调剂 +9 南迦720 2026-02-28 10/500 2026-03-01 10:55 by sunny81
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[硕博家园] 博士自荐 +6 科研狗111 2026-02-26 10/500 2026-03-01 10:02 by 科研狗111
[论文投稿] Optics letters投稿被拒求助 30+3 luckyry 2026-02-26 4/200 2026-03-01 09:06 by babero
[考研] 298求调剂 +5 axyz3 2026-02-28 5/250 2026-03-01 06:45 by 刘兵
[考研] 285求调剂 +6 满头大汗的学生 2026-02-28 6/300 2026-03-01 06:29 by Trying]
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[考研] 307求调剂 +4 73372112 2026-02-28 6/300 2026-03-01 00:04 by ll247
[考研] 085600材料工程一志愿中科大总分312求调剂 +8 吃宵夜1 2026-02-28 10/500 2026-02-28 20:27 by L135790
[考研] 0856材料求调剂 +10 hyf hyf hyf 2026-02-28 11/550 2026-02-28 18:50 by 无际的草原
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭