应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！
51/1返回列表
查看: 1484  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！ 已有2人参与

准备构建pET28a-MAN重组质粒，MAN基因在pUC57载体上，长度1100bp。
现把pET28a和pUC57分别双酶切后跑胶，见图一，分别切下1100bp和5300bp的片段然后用天根琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收后，再跑胶鉴定出现了两条带分别在750bp和2500bp处出现多余的带，见图二。
请大家帮忙看看这是怎么回事？实验卡在这，急急急啊~~~

构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！
图1.MAN和pET-28a质粒双酶切后跑胶.jpg


构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！-1
图2.MAN和pET-28a质粒双酶切胶回后鉴定.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-05 11:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
屁桃粉: 金币+10, ★有帮助 2016-03-06 21:23:32
看酶过期了没，然后建议换普通takara的酶双酶切，别用快切酶系统。分子实验多试几次就好，这个不麻烦。
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-06 10:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

aoluoquan

银虫 (正式写手)
第二个图是回收产物，直接电泳的吗？还是连接转化小抽酶切鉴定的结果，用的哪个公司的酶体系条件，酶切位点，序列，做之前有没有测序？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-05 13:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aoluoquan at 2016-03-05 13:23:48
第二个图是回收产物，直接电泳的吗？还是连接转化小抽酶切鉴定的结果，用的哪个公司的酶体系条件，酶切位点，序列，做之前有没有测序？

图二是酶切回收产物直接电泳的，takara 公司的QuickCut EcoRI和XhoI，pET28a是商用载体，pUC57-MAN是生物公司合成的
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-05 14:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-06 10:58:14
看酶过期了没，然后建议换普通takara的酶双酶切，别用快切酶系统。分子实验多试几次就好，这个不麻烦。

我刚买的酶呢，保质期到18年，那我再试下普通酶，谢谢谢谢~~O(∩_∩)O
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-06 21:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 高分子化学与物理调剂 +6 好好好1233 2026-02-28 12/600 2026-03-01 19:48 by 好好好1233
[考研] 0805总分292，求调剂 +5 幻想之殇 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无懈可击111
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +5 礼堂丁真258 2026-02-28 7/350 2026-03-01 19:12 by Js512888
[考研] 一志愿中南大学理学化学 +4 15779376950 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:00 by Fff-1
[考研] 272求调剂 +6 材紫有化 2026-02-28 6/300 2026-03-01 18:58 by 18137688336
[考研] 291分工科求调剂 +9 science饿饿 2026-03-01 10/500 2026-03-01 18:55 by 18137688336
[考研] 295求调剂 +7 19171856320 2026-02-28 7/350 2026-03-01 18:54 by 18137688336
[考研] 0857调剂 +3 一ll半 2026-02-28 3/150 2026-03-01 18:32 by 热情沙漠
[考研] 材料类求调剂 +10 wana_kiko 2026-02-28 11/550 2026-03-01 18:11 by 海嵙Y
[考研] 321求调剂一志愿东北林业大学材料与化工英二数二 +4 虫虫虫虫虫7 2026-03-01 7/350 2026-03-01 16:52 by caszguilin
[考研] 化工专硕342，一志愿大连理工大学，求调剂 +3 kyf化工 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:49 by yywzz
[基金申请] 刚录用，没有期刊号，但是在线可看的论文可以放为代表作吗 10+3 arang1 2026-03-01 3/150 2026-03-01 16:43 by babero
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考研] 材料调剂 +4 爱擦汗的可乐冰 2026-02-28 4/200 2026-03-01 00:38 by 猫猫球alter
[基金申请] 面上模板改不了页边距吧？ +5 ieewxg 2026-02-25 6/300 2026-03-01 00:10 by addressing
[考研] 304求调剂 +3 52hz~~ 2026-02-28 5/250 2026-03-01 00:00 by 52hz~~
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭