应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！
51/1返回列表
查看: 1740  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)

[求助] 构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！ 已有2人参与

准备构建pET28a-MAN重组质粒，MAN基因在pUC57载体上，长度1100bp。
现把pET28a和pUC57分别双酶切后跑胶，见图一，分别切下1100bp和5300bp的片段然后用天根琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒回收后，再跑胶鉴定出现了两条带分别在750bp和2500bp处出现多余的带，见图二。
请大家帮忙看看这是怎么回事？实验卡在这，急急急啊~~~

构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！
图1.MAN和pET-28a质粒双酶切后跑胶.jpg


构建重组质粒遇到了问题，请大家帮忙看看~~谢谢~~！-1
图2.MAN和pET-28a质粒双酶切胶回后鉴定.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2016-03-05 11:57:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by aoluoquan at 2016-03-05 13:23:48
第二个图是回收产物，直接电泳的吗？还是连接转化小抽酶切鉴定的结果，用的哪个公司的酶体系条件，酶切位点，序列，做之前有没有测序？

图二是酶切回收产物直接电泳的，takara 公司的QuickCut EcoRI和XhoI，pET28a是商用载体，pUC57-MAN是生物公司合成的
赞一下 回复此楼
3楼2016-03-05 14:14:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

aoluoquan

银虫 (正式写手)
第二个图是回收产物，直接电泳的吗？还是连接转化小抽酶切鉴定的结果，用的哪个公司的酶体系条件，酶切位点，序列，做之前有没有测序？

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-03-05 13:23:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ken19860823

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
屁桃粉: 金币+10, ★有帮助 2016-03-06 21:23:32
看酶过期了没，然后建议换普通takara的酶双酶切，别用快切酶系统。分子实验多试几次就好，这个不麻烦。
赞一下 回复此楼
做基因修饰的老菜鸡
4楼2016-03-06 10:58:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

屁桃粉

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ken19860823 at 2016-03-06 10:58:14
看酶过期了没，然后建议换普通takara的酶双酶切，别用快切酶系统。分子实验多试几次就好，这个不麻烦。

我刚买的酶呢，保质期到18年，那我再试下普通酶，谢谢谢谢~~O(∩_∩)O
赞一下 回复此楼
5楼2016-03-06 21:23:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +15 爱看书的可乐 2026-08-26 17/850 2026-08-27 20:36 by xxniao123
[基金申请] 申请删除本帖 +6 lyz123lyz 2026-08-27 7/350 2026-08-27 17:31 by 宁静致远sy
[基金申请] 基金不中，共勉 +10 eulota 2026-08-26 10/500 2026-08-27 17:23 by lqllinqiaoli
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 LIbGuocjEEYw 2026-08-26 4/200 2026-08-27 04:33 by Ie9AyIAvGbvs
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 系统查不到 +10 董八千 2026-08-26 10/500 2026-08-26 16:30 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗？ +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了！？ +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑，不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭