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1740OMG

新虫 (小有名气)

[交流] DNA琼脂糖凝胶电泳图,条带W状,怎么回事 已有6人参与

我们在做基因型鉴定。有WT、杂合子、纯合子3种基因型(400~700bp)。用的1.2%的琼脂糖凝胶,上样10uL。电泳120V,40min。之前很好,这次就这样的条带,换了电泳槽的缓冲液也没解决。 第一条是MAKER,跑的也不好。 大家帮我分析下。

DNA琼脂糖凝胶电泳图,条带W状,怎么回事
琼脂糖电泳图-W状.png
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自然_法则

银虫 (初入文坛)

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1740OMG: 金币+3, 谢谢 2016-02-29 15:24:28
从你这个图上来看,你的marker跑开了,只是所有的样都弯曲了,有两个方面的可能原因:1.胶浓度较高,关键是没有混匀就凝固了,导致凝胶在缓冲液里分布不均,你试试用1%的浓度配胶,同时注意摇匀后灌胶;2.电压不稳,导致跑胶过程中条带歪曲,也不用那么高的电压跑的,你试试恒流跑20—30mA,恒压显示一般为50-60V(这个跟电泳槽有关,具体的数据看你的电泳槽说明)。希望对你有帮助
每一个结果都有与之关联的起因我称之为结果论
2楼2016-02-29 10:50:35
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Echo2017

银虫 (小有名气)


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引用回帖:
2楼: Originally posted by 自然_法则 at 2016-02-29 10:50:35
从你这个图上来看,你的marker跑开了,只是所有的样都弯曲了,有两个方面的可能原因:1.胶浓度较高,关键是没有混匀就凝固了,导致凝胶在缓冲液里分布不均,你试试用1%的浓度配胶,同时注意摇匀后灌胶;2.电压不稳, ...

有一个疑问,如果是胶浓度的问题,那有可能全部是规则的w吗?

发自小木虫Android客户端
3楼2016-02-29 15:38:23
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vivd娟

金虫 (小有名气)


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应该是胶布均一吧 ,你要把胶煮沸几次才好。
4楼2016-03-02 08:27:54
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凉爽的纯净水

新虫 (初入文坛)


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是不是用水冲冷却了?

发自小木虫Android客户端
5楼2016-03-02 08:40:13
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1740OMG

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 凉爽的纯净水 at 2016-03-02 08:40:13
是不是用水冲冷却了?

没有用水冲来冷却,是在摇床上摇晃8分钟冷却的。每次煮沸3次,应该煮匀了吧。
6楼2016-03-02 13:58:00
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边木殇

木虫 (小有名气)


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感觉是胶冷却的时候没有均匀冷却或者冷却时间太长,电压不稳或者过高,我们一般用100v
7楼2016-03-02 14:11:24
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wuzhaoxiang

金虫 (初入文坛)


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这种情况基本可以断定是电压过高导致。
8楼2016-03-02 15:29:58
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匿名

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1740OMG: 金币+2, 谢谢 2016-03-04 20:46:34
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9楼2016-03-02 15:51:53
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反正比函数

木虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
原因可能有三 第一电压太高 第二制胶时候泳道口不规整 第三 缓冲液没有及时更换

发自小木虫IOS客户端
10楼2016-03-02 15:58:28
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