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redking2012

木虫 (正式写手)

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[交流] ssDNA的纯化问题

最近在纯化单链DNA，大概长5k，用qiagen的dna纯化试剂盒纯化之后，得到的产物量相当低。貌似qiagen的试剂盒是专门为双链DNA设计的。请问大家有没有单链DNA的纯化方法或者试剂盒

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1楼2016-02-27 23:04:18

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oliviashane

新虫 (小有名气)

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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
redking2012: 金币+5, 有用有帮助 2016-02-28 18:02:30

QIAquick PCR产物纯化试剂盒（Qiagen）是可直接纯化扩增后的双或单链PCR产物（100 bp-10 kb），最多纯化得到10微克DNA，达到90-95%的回收率。你的回收率低是有很多原因的，比（1）切入多余凝胶使纯化时琼脂糖凝胶未完全融化。对此建议尽量切掉不含DNA的琼脂糖凝胶，离心纯化柱内最大不要超过400mg琼脂糖凝胶，或者增加温育时间至15分钟，每2分钟混匀一次。（2）制备的琼脂糖凝胶浓度过高。对此建议配制0.8%~1.0%的琼脂糖凝胶进行回收。（3）有乙醇或异丙醇残留，建议增加离心时间或增加静置时间，使乙醇或异丙醇挥发完全。（4）洗脱温度过低或洗脱时间过短。建议在加入无菌超纯水或10 mM Tris·Cl（pH 8.5）后，于37℃温育2分钟。