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作者
最后发表
分子生物
干货分享|化学感受态细胞进行转化的选择法则
常用于细菌转化的大肠杆菌菌株包括DH5α、BL21、HB101和
JM109
。每个菌株可通过基因型进行描述,基因型中列出了诸如插入或缺失突变。菌株的基因型在决定其是否适用于特定克隆实验中具有关键...
MDL医学实验
2024-02-18 03:32
分子生物
摇菌过程中死亡
最近用普通LB无抗培养基摇大肠杆菌,有DH5α,
JM109
,?XL1-Blue和TG1。在振荡培养3-6个小时过程中老是出现XL1-Blue,TG1沉淀死亡,而DH5α和
JM109
正常,请问大家知道是什么原因吗?...
cjming+-
2023-03-05 08:40
硕博家园
质粒重组后,insert变短了。求质粒构建相关的大神分析可能原因。
电转化成功,涂布进行蓝白筛选:无单克隆长出②使用pUC119,结果同pUC118:小提产物使用SalI酶切,电泳得到5KB的片段………………4、更换感受态细胞使用
JM109
,结果同DH5α:小提产物使用...
赛777777
2023-02-22 10:42
分子生物
[求助]定点突变pcr产物,转化后提不出质粒
PCR之后用DpnⅠ消除模板,转化
JM109
或BL21,然后挑菌送测序。最近总出现挑到的菌提质粒浓度很低是(三四十左右),送不了测序的那种,偶尔提出质粒浓度正常的还是模板情况。而且我发现这种...
Dusk_star
2021-12-09 12:12
微生物
救助,
jm109
菌株中做pqe60相关蛋白表达
本人在
jm109
菌株中做pqe60相关蛋白表达,目前就做出一个基因的可以表达,其他基因同样的方法构建,位点都一直,后续加iptg都一样,就是无法表达,想请教一下有没有办法,要怎么比较好的表达...
zz345
2021-11-30 08:55
分子生物
有人用DMT感受态细胞么,效果如何?
最近做大量点突变,我看DMT细胞介绍的能够自己降解质粒模版,请问有人用过嘛,效果怎么样。有没有什么劣势,替代
JM109
。买的感受态的话,以后能否自己制备感受态。
Dusk_star
2021-11-22 03:45
分子生物
质粒构建过程中,载体上基因大量丢失
并分别转化入BL21,Trans10和
JM109
感受态,并使用有潮霉素和氨苄的抗性平板进行筛选12小时后,挑取单菌落进行菌落PCR(引物位置在潮霉素基因上),结果呈阳性挑取阳性菌在含有潮霉素和氨苄...
wilsonismal
2021-04-18 06:58
微生物
大肠杆菌
JM109
、DH5α、BL21有什么区别?
DH5α括号里的DE3又是啥意思?求详解
zzx1106
2020-06-18 02:36
微生物
omega大提质粒
(
JM109
)pcDNA3.1载体菌产量低,质粒大提时浓度想要达到1000ug/ml。说明书:每次200ml菌液,solution1和2加入10ml,solution3加5ml。尝试了200ml,400ml,800ml,1200ml菌液,按说明书要求...
肥桃乌龙
2019-11-25 07:02
微生物
pcDNA3(
JM109
)空载菌无法收菌
大量表达培养pcDNA3(
JM109
)空载菌,收菌时沉淀总是散,成流沙状絮状无法收集。培养步骤如下:1、负80度冻存菌摇菌活化过夜再划平板2、待平板长出菌落,每试管&129514;3mlLB/Amp培养基,挑取...
肥桃乌龙
2019-11-21 03:47
微生物
求大神解释一下
利用同尾酶切割基因和质粒,然后连接后导入到
jm109
中,再提出来发现质粒还没有空载体大,怎么回事
永不退缩的狼
2019-03-28 09:01
分子生物
双质粒系统的knock-in载体donorDNA区构建
有没有经常做酶切连接的大神来看一看。knockout和knockin两个载体同时在构建。knockout是将目的基因上下游同源臂A,B通过overlappcr连在一起,然后酶切连接到载体上。knockin是在上述基础上...
JM109
2019-02-22 03:39
分子生物
工程菌的构建
请问下大肠杆菌
JM109
菌种一般用于表达还是克隆youlinglyw
噢特曼额
2018-12-01 08:39
硕博家园
细菌的Red同源重组,基因敲除
一,携带pKOBEG质粒的
JM109
,30℃摇菌2小时,然后加阿拉伯糖至终浓度为千分之一,再摇菌1小时!二,用携带待敲基因上下游各500bp的,同源片段,电转pKOBEG/
JM109
.三,抗性平板,铺板!现在的...
141218
2018-11-29 04:10
分子生物
关于Dpn1的一个问题
以质粒为模版扩增得到的pcr产物,能不能用Dpn1处理然后直接上柱纯化,代替跑电泳切胶溶胶这一步呢
JM109
2018-04-24 08:40
微生物
一个和大肠类似的菌
最近转化了一批大肠
JM109
,挑单菌落摇瓶培养后,颜色和大肠一样,味道不太对。镜检发现是格兰仕阴性菌,100倍油镜下看到是椭圆形很小的菌。这个菌在4度冰箱都能长,想问下大佬们这个是什么...
WSZmichael
2018-03-27 08:51
文献求助
请帮忙下载文献,谢谢!
Isac,
JM
(Isac,Jean-Michel)[1];Travers,P(Travers,Pascal)[1];Santos,JP...04300510.1103/PhysRevLett.
109
.043005https://journals.aps.org/prl/abstract/10.1103/PhysRevLett.
109
.043005
lixf
2017-12-14 01:25
文献求助
文献求助
Frigerio,
JM
(Frigerio,
JM
)info'.1.'][info2]OpticalpropertiesofVO2thinfilmsintheir...[info5]卷:3738页:102-
109
info'.5.'][info6]doi:10.1117/12.360070info'.6.']...
阳光雨后
2017-11-08 06:08
硕博家园
关于克隆问题
fidelity酶扩增出目的基因,然后和pmd-18t连接,目的基因3500左右,所以我16度连接了14个小时,然后转化到
JM109
中,但是挑斑提质粒之后,质粒好像是有问题,只有一条条带并且大小已经超过...
xu-jin
2017-09-04 07:58
分子生物
TA克隆后提取质粒后跑电泳出现了很多杂带.
电泳图如下:
JM109
过夜培养后,用宝生物的质粒小量纯化试剂盒,提取质粒(PMD19(2679bp),目的片段600bp)应该在3300bp左右(maker第八条带和第九条带之间)出现条带,结果条带非常杂乱,...
静默人声412
2017-07-24 09:25
分子生物
T-A克隆后做菌落PCR,出现两个条带.
电泳照片如下,最底下的是引物,上面两条带最亮的是目的条带但是比我计算的小,但是第二条浅带不知道是什么...质粒用的宝生物的PMD19(simple),感受态细胞
JM109
,用的该质粒的通用引物扩的.
静默人声412
2017-07-24 09:28
文献求助
文献求助
[info1]ShragerJ,Tenenbaum
JM
info'.1.'][info2]Rapidlearningforprecisiononcologyinfo'.2.'][info3]NatRevClinOncol...[info4]2014info'.4.'][info5]
109
-118info'.5.']...
萌萌大宝贝
2017-07-13 01:41
分子生物
基因连接、转化,菌液PCR验证,发现片段丢失
2kb的PCR产物与7.9Kb的载体连接,热激转化至大肠
JM109
。菌液PCR验证阳性菌株,引物在多克隆位点两端设计,大约300kb。菌液PCR结果,大量300bp,有个别1200左右、1000左右、750bp、600bp、...
glc880824
2017-06-05 12:19
文献求助
Scalable microcarrier-based manufacturing of mesenchymal ...
JM
2.info'.1.'][info2]Scalablemicrocarrier-basedmanufacturingofmesenchymalstem/stromalcells.info'.2.'][info3]JBiotechnol....info'.4.'][info5]236:88-
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.info'.5.']...
静待天享
2017-06-01 01:12
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