应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因连接、转化，菌液PCR验证，发现片段丢失
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 1361  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

glc880824

金虫 (小有名气)

[求助] 基因连接、转化，菌液PCR验证，发现片段丢失 已有1人参与

各位大神，现在实验遇到一个棘手的问题，希望大家帮我解决。
2kb的PCR产物与7.9Kb的载体连接，热激转化至大肠JM109。菌液PCR验证阳性菌株，引物在多克隆位点两端设计，大约300kb。菌液PCR结果，大量300bp，有个别1200左右、1000左右、750bp、600bp、350bp 左右等片段，没有2.2kb左右的阳性片段。求各位大神帮我分析下怎么回事？谢谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-06-05 20:19:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

伤何处

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-06-06 07:47:26
首先确定PCR产物上本身没有你用的酶切位点。PCR产物和载体是分别酶切然后电泳切胶回收的么？ 还有就是你的引物载体上是否特异，拿未酶切的载体做模板扩的时候，是只有一个300bp的条带么。
如果还不行，挑几个去测序看下，连上的是什么片段。
赞一下(2人) 回复此楼
对也罢，错也罢；正也罢，逆也罢；通途也好，崎岖无妨……但问，吾心坚否？若坚，纵使歧路，以铁心，贯穿而过，亦为大道！不坚，便是坦途，也难登临绝顶，观险峰
2楼2017-06-05 22:19:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

glc880824

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 伤何处 at 2017-06-05 22:19:38
首先确定PCR产物上本身没有你用的酶切位点。PCR产物和载体是分别酶切然后电泳切胶回收的么？ 还有就是你的引物载体上是否特异，拿未酶切的载体做模板扩的时候，是只有一个300bp的条带么。
如果还不行，挑几个去测 ...

连接前已经验证，双酶切PCR产物2k，连接前都没有问题，引物也没有问题，扩增载体是300bp。现在就是转化筛选后，转化子菌液PCR片段大小不一，根本没有2k的片段。
赞一下 回复此楼
3楼2017-06-05 23:10:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邢曙光

木虫 (小有名气)
我都做了两个月了，4k的片段连6k的载体，怎么也出不来阳性菌

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
4楼2017-06-06 00:14:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hzau103

新虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 邢曙光 at 2017-06-06 00:14:06
我都做了两个月了，4k的片段连6k的载体，怎么也出不来阳性菌

试试多片断链接试剂盒

发自小木虫Android客户端
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2017-06-06 00:22:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 glc880824 的主题更新
51/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学338求调剂！ +5 Zuhui0306 2026-03-26 6/300 2026-03-26 23:42 by 381988266
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +3 荷包蛋hyj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 23:19 by 无懈可击111
[考研] 294分080500材料科学与工程求调剂 +4 柳溪边 2026-03-26 4/200 2026-03-26 21:14 by XPU李庆
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 20:33 by cy128
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-26 3/150 2026-03-26 19:57 by nihaoar
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 7/350 2026-03-26 19:18 by macy2011
[考研] 材料考研求调剂 +3 Dendel 2026-03-23 6/300 2026-03-26 17:51 by fmesaito
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +17 tcxiaoxx 2026-03-20 19/950 2026-03-26 16:04 by 不吃魚的貓
[硕博家园] 北京林业大学硕导招生广告 +5 kongweilin 2026-03-26 7/350 2026-03-26 14:37 by mapenggao
[考研] 化学调剂一志愿上海交通大学336分-本科上海211 +4 小鱼爱有机 2026-03-25 4/200 2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 299求调剂 +4 15188958825 2026-03-25 4/200 2026-03-25 22:56 by 418490947
[考研] 各位老师您好：本人初试372分 +5 jj涌77 2026-03-25 6/300 2026-03-25 14:15 by mapenggao
[考研] 347求调剂 +4 L when 2026-03-25 4/200 2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 材料学硕，求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 085600材料与化工调剂 +9 A-哆啦Z梦 2026-03-23 15/750 2026-03-25 11:18 by Ainin_
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[论文投稿] 急发核心期刊论文 +3 贤达问津 2026-03-23 5/250 2026-03-23 17:13 by 妹子不好惹
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 22408 344分 求调剂 一志愿 华电计算机技术 +4 solanXXX 2026-03-20 4/200 2026-03-20 23:49 by alg094825
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭