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分类 共搜索到 292 个相关话题(最多显示前5000个) 作者 最后发表
分子生物 质粒载体
多克隆位点还允许使用两种不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）对其进行切割，然后克隆一个具有一个EcoRI末端和一个BamHI末端的DNA片段。这称为定向克隆，因为插入的DNA只能以一个方向放入载体...
 YX科研小助理 2024-05-31 08:01
动植物 干货分享|质粒载体
多克隆位点还允许使用两种不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）对其进行切割，然后克隆一个具有一个EcoRI末端和一个BamHI末端的DNA片段。这称为定向克隆，因为插入的DNA只能以一个方向放入载体...
 超困困狗g 2024-05-13 12:51
分子生物 干货分享|质粒载体
多克隆位点还允许使用两种不同的限制酶（例如EcoRI和BamHI）对其进行切割，然后克隆一个具有一个EcoRI末端和一个BamHI末端的DNA片段。这称为定向克隆，因为插入的DNA只能以一个方向放入载体...
 医学验证123 2024-04-01 07:19
微生物 利用整合型质粒做同源重组的问题
我要做枯草芽孢杆菌芽孢展示，amyE是枯草芽孢杆菌...利用amyE臂作同源重组，我想在amyE上下游之间插入目的基因（Ecori，HindIII酶切位点），但是amyE下游在5‘，amyE上游在3’？没关系的吗？
 ningdeyu 2024-02-02 07:05
分子生物 双酶切求助！
双酶切后载体条带很浅实验内容是载体和插入片段同时酶切过夜，用的EcoRI和BamHI，片段和载体都是50体系，且都加了500ng,试过把载体加到1000ng，跑出来的条带是插入片段是亮的，载体条带很浅...
 C12ire1 2023-05-11 12:33
生物科学 pPIC9K和目的基因构建
我把我的目的基因插入到pPIC9K的EcoRI和NotI之间，请问分泌表达时，信号肽切割完成后，目的基因前面的氨基酸怎么弄，还有就是，终止子前面还有好多无关氨基酸，都是怎么去除的希望各位...
 231584 2022-08-02 09:44
微生物 质粒提取及原理这些你都知道吗
碱法抽提得到质粒样品中不含线性DNA，可以采用EcoRI来线性化质粒后再进行琼脂糖电泳，就会看到线性质粒DNA的位置与这三条带的位置不一样。其实这三条带以电泳速度的快慢而排序，分别是超...
 北京艾柏森 2021-11-08 01:27
分子生物 求助：请问构建这个质粒时选择了EcoRI和BamHI位点，设计引物时...
载体为：PBV220,酶切位点为EcoRI和BamHI（上游、下游），请问插入目的基因片段时如何看是否发生移码？万分感谢！质粒序列为：1...
 晴木川 2021-10-15 09:26
硕博家园 载体
哪些载体是T7启动子，氨苄抗性，3000左右呢，含有BamHI和EcoRI
 圆圈爱圈圆 2021-08-12 02:08
硕博家园 酶切切不开
我用EcoRI和ClaI酶切我的1301载体，无论是单酶切还是双酶切都是只能切开单链，而不能切陈想要的片段大小，两个酶切位点之间大约5500bp。各位大神帮忙看看是怎么回事
 闲人清风 2020-11-17 02:19
分子生物 酶切的时候两个内切酶可以一起吗可以和连接载体一起吗
我用的是EcoRI-HF和BAMHI-HF第一次做不知道怎么做。后面连接载体用的是1304用T4连接酶可以吗体系啥的我都不知道哭了
 AmaliaWong 2020-05-19 10:46
硕博家园 求助前辈，为什么我的目的基因构建在pET28a上换了酶切位点，不...
刚接触原核表达不大了解质粒，刚开始先在pET28a选择酶切位点BamHI和EcoRI插入目的基因了（质粒图谱如下），转化BL21（DE3）有大量表达，但是后来发现目的蛋白前有34个非目的蛋白的氨基酸...
 检验小生 2019-11-03 04:56
微生物 老师，麻烦您了，想问问为什么我的目的基因构建在pET28a上换了酶...
老师，麻烦您了，想咨询一下目前实验的问题刚接触原核表达不大了解质粒，刚开始先在pet28a选择酶切位点bamhi和ecori插入目的基因了（质粒图谱如下），转化bl21（de3）有大量表达，但是后来...
 检验小生 2019-11-03 04:49
分子生物 大肠杆菌pet28a载体上限制性内切酶位点的选择
虫友们好，我想利用大肠杆菌BL21（DE3）作为宿主，利用pET28a作为载体...已知目的基因上有EcoRI和SphI两个限制性酶切位点，不知道应该怎样选择限制性酶切位点才能启动强表达该目的蛋白。谢谢！
 bio-boy 2019-07-21 01:26
分子生物 克隆连接后无果～求赐教…
EcoRI和BglII双酶切…大片段载体大概10kb，插入片段200bp左右，T4连接一直无果，16度过夜后放4度半天，平板有些许克隆，但都不是重组产物，目测大部分都是载体片段………求大牛赐教该肿么破...
 skynet999 2019-06-17 09:41
微生物 关于pet28a双酶切
有用HindIII与EcoRI双酶切pet28a质粒的嘛？我用NEB快切酶，35切2h，跑电泳只能看到一条5000多的条带，不知道能不能切好埃目前做连接老是连接不上，所以考虑是不是载体没切好。
 wangpei2433 2019-02-19 01:36
硕博家园 质粒构建
构建了一个质粒，载体6535bp，目的基因1000bp，菌落pcr验证正确，但是用相应酶切位点speI和BamHI双酶切切不开，在用其他的EcoRI和HindIII切开了，本来应该是3400+4000的，但是确是6500+1000...
 青柠檬PCR 2018-11-01 01:05
分子生物 原核表达
求解答：我做的鳖的抗菌肽蛋白原核表达，我先用PMD-18T载体和我的基因成熟肽连接，然后把PMD-18T-成熟肽的重组质粒和PET-his质粒（Amp抗性）分别同时双酶切（HindIII和EcoRI），分别胶回收...
 月下影相随 2018-10-07 01:48
分子生物 初学pcr，对下游引物的设计不太明白？
请问一下下游引物的酶切位点应该怎么写？需要互补吗？比如保护碱基是G，EcoRI是GAATTC，引物是*那上游引物应该是5'GGGTACC*3'下游引物应该怎么写呢
 慧唱歌的猪猪 2018-09-21 11:34
硕博家园 转化DH5a出现很多假阳性
本人在做克隆表达，载体是pET28a，目的基因是从基因组PCR获得的产物，上面有EcorI和HindⅢ酶切位点，分别加了一个保护碱基和两个保护碱基，所购买的限制酶是快切酶，PCR产物在37℃酶切5min...
 Cherishqj 2018-08-29 01:56
分子生物 酶切表达载体
我用EcoRI和BamHI酶切PYES2表达载体4h，电泳验证不知道为什么表达载体老是出现两条带，求大神解答
 小花猫01 2018-07-09 07:19
硕博家园 单酶切出问题求帮忙
我用EcoRI酶进行单酶切，确定在片段上没有酶切位点，酶切三小时，目前出现多条带，原因是啥，求帮助，体系：酶：1微升，质粒：1微升
 xinnnsy 2018-05-03 12:30
分子生物 双酶切构建pGADT7载体出问题？求助
酶切体系50ul（用的全式金的EcoRI和BamHI)酶切目的条带时：PCR胶回收产物和连测序载体的都酶切了）DNA5ulBuffer5ulEcoRI1ulBamHI1ulddH2O38ul37℃反应2小时连接体系10ul(诺维赞的T4连接酶）...
 18754802930 2018-04-16 03:07
生物科学 ppic9k和目的基因构建
我把我的目的基因插入到pPIC9K的EcoRI和NotI之间，请问分泌表达时，信号肽切割完成后，目的基因前面的氨基酸怎么弄，还有就是，终止子前面还有好多无关氨基酸，都是怎么去除的希望各位...
 墨迹太深 2018-03-19 03:30
考研 275求调剂
275求调剂
 Ecori123 2018-03-19 02:06
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