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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 原核表达
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月下影相随

新虫 (初入文坛)

[交流] 原核表达 已有4人参与

求解答：我做的鳖的抗菌肽蛋白原核表达，我先用PMD-18T载体和我的基因成熟肽连接，然后把PMD-18T-成熟肽的重组质粒和PET-his质粒（Amp抗性）分别同时双酶切（HindIII 和 EcoRI），分别胶回收之后连接，然后导入E.coli DH5a正常生长，检测序列正确然后提取PET-his-成熟肽重组质粒导入到E.coli BL21（DE3），（未知重组质粒是否成功导入）E.coli BL21（DE3）在含有氨苄的LB平板上不长菌，（注：直接扩大导入重组质粒后的E.coli BL21（DE3）菌液细菌扩大培养，PCR检测我的成熟肽有条带，送测序检测说未检测到质粒），毕业论文很着急（这一步已经反复修改实验一个月了就是不成功），请各位大神帮解答，谢谢！
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1楼 2018-10-07 21:13:48
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biosci

捐助贵宾 (职业作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
毒性蛋白吧，建议换个宿主细胞菌

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2楼2018-10-08 23:25:41
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bio转录组

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
挑菌，提质粒-送测
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生活活生生累死
3楼2018-10-09 08:29:02
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吴淑望

新虫 (初入文坛)
引物，是否正确

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4楼2018-11-06 18:14:15
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6JJ6JJ

银虫 (正式写手)
关注

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5楼2020-11-10 21:50:20
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