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新虫 (初入文坛)

[求助] 初学pcr，对下游引物的设计不太明白？

请问一下下游引物的酶切位点应该怎么写？需要互补吗？

比如保护碱基是G，EcoR I是GAATTC，引物是***********

那上游引物应该是5'G GGTACC ***********3'

下游引物应该怎么写呢

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1楼 2018-09-22 07:01:34

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新虫 (小有名气)

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2018-09-22 10:24:24

不用反向互补，保护碱基+酶切位点+下游引物，酶切位点反向互补还是它，没什么变化，你反向互补的那里怎么酶切位点变了

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2楼2018-09-22 08:06:25

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新虫 (初入文坛)

引用回帖:

2楼: Originally posted by Agonilb at 2018-09-22 08:06:25
不用反向互补，保护碱基+酶切位点+下游引物，酶切位点反向互补还是它，没什么变化，你反向互补的那里怎么酶切位点变了

啊不好意思，早上还没睡醒写错了
上游引物是5'G GAATTC***********3'
那下游引物是5'G CTTAAG**********3'吗

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3楼2018-09-22 08:51:50

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新虫 (小有名气)

你不觉得你就算是反向互补也互补错了吗，GAATTC反向互补还是GAATTC

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4楼2018-09-22 11:38:13

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