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分类 共搜索到 23 个相关话题(最多显示前5000个) 作者 最后发表
生物科学 一文了解引物的相关问题
电泳时的条带非常宽，带与带之间有重叠，分辨率已下降，电泳后割带回收目的...当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题。...
 科研小努力 2023-08-14 06:21
分子生物 经验分享|一文了解引物的相关问题
电泳时的条带非常宽，带与带之间有重叠，分辨率已下降，电泳后割带回收目的...当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出、扩增效率低的问题。...
 球场下雪了 2023-06-15 03:26
分子生物 PCR实验的常见问题（经验总结）
①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为...每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。...
 pcqc1400 2021-12-23 06:37
分子生物 同样的模板，同样的条件试剂，隔了一周就死活扩不出目的条带了
纯菌菌液提取的基因组dna作为模板，25微升体系，目的条带片段大小约350bp，上周都能扩到清晰目的条带，但这周重新跑就一直扩不...更换新的试剂、引物、水跑了七八遍了还是没有，退火温度也从...
 makotoichi 2021-05-06 12:19
分子生物 【技术资源】PCR常见问题汇总！
浓度过高可降低pcr扩增的特异性，浓度过低则影响pcr扩增产量甚至使pcr扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变...假阳性出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。...
 huaguan113 2019-06-25 10:44
分子生物 【技术资源】PCR常见问题汇总
浓度过高可降低PCR扩增的特异性，浓度过低则影响PCR扩增产量甚至使PCR扩增失败而不出扩增条带。反应体积的改变...假阳性出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。...
 dandichen 2019-06-24 02:26
分子生物 PCR技术大攻略
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。注意事项：1.由于pcr反应灵敏度...8.电泳时使用dna分子量标准品（指示是否pcr失败或条带跑出凝胶或拍照系统失败）。...
 anfen2366 2019-06-14 09:48
分子生物 史上最全点突变实操
但是如今一般实验室较少使用酚氯仿这类试剂，实验室使用商品化的PCR产物纯化试剂盒也能完成这一步的产物纯化工作。...MasterP一言以蔽之：不要用TaqDNA聚合酶，选一个能扩增长片段的高保真DNA...
 xuyuzhi 2019-05-20 01:13
分子生物 PCR常见问题分析，你了解吗？
2、假阴性，不出现扩增条带（1）PCR反应的关键环节有：①模板核酸的制备；②引物的质量与特异性；③酶的...3、假阳性：出现的PCR扩增条带与目的靶序列条带一致，有时其条带更整齐，亮度更高。...
 华联科生物 2018-10-17 09:08
分子生物 PCR知识知多少
递减PCR对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用，如AFLP?DNA指纹分析。原理就在于，温度的...引物用量过多，容易导致引物二聚体（电泳时位于前方不成条带的小片段）的出现。...
 华联科生物 2018-07-10 10:52
分子生物 PCR知识知多少
递减PCR对于那些不了解引物和目的模板同源性程度的方法更为有用，如AFLP?DNA指纹分析。原理就在于，温度的...引物用量过多，容易导致引物二聚体（电泳时位于前方不成条带的小片段）的出现。...
 华联科生物 2018-05-30 08:42
分子生物 献给初学者：PCR 看这篇就够了
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板的拷贝。PCR的反应动力学PCR...PCR常见问题原因及对策无扩增条带1....
 myhalic 2017-12-26 08:07
分子生物 PCR没有模板也能扩出目的条带
每次做PCR实验很少加空白对照,最近发现空白对照也能扩出目的片段。以为是那个成分污染了，换掉了除引物以外的所有成分，结果还是能扩出来。...一对引物空白能扩出目的条带，而另一对引物不能。...
 尽为幸福 2017-05-19 12:05
分子生物 反转录后PCR扩不出目的条带
只有一个细胞株，想要从这个细胞株里提RNA，反转录后PCR扩出需要的目的基因序列。反转录后PCR用了GAPDH的引物做对照，GAPDH能够扩出来，但是需要的目的基因条带一直扩不出来，条带都没有。...
 半岛铁盒lsf 2014-11-11 03:47
分子生物 10ul体系能跑出条带，20ul体系却没有任何条带了，需要胶回收，求...
我要扩的目的条带只有250bp，扩了很久都没扩出来，上次换了酶和模板在10ul体系下扩出一条疑似目的条带，可换成20ul体系其他条件都不变却没有任何条带。...应该没什么影响，PCR仪也应该支持的，...
 伸手触梦 2014-08-07 01:11
分子生物 pcr 扩不出目的带啊，求帮忙
以基因组为模板扩得出2500多bp的片段，换引物想再加扩上游的300多bp就怎么也只能出1500bp以下的明亮条带！降低退火温度到50，...还有个问题，用能扩出基因组的引物去扩cdna，一条带都没有！...
 hxswdl 2012-08-18 11:06
分子生物 PCR回收产物做PCR模板，为什么扩不出来
请教各位虫子，是否模板加多了，PCR也会扩增不出条带？我用质粒为模板，选用一对引物扩增目的片段，胶回收，第二次想再...但是没有目的条带，再用质粒做模板就能扩增出来，是我模板加多了吗？...
 小番茄 2012-07-15 03:02
分子生物 求助啊~PCR有时候能扩出目的条带，有的时候不可以
用了12个模板，一共扩出来7个，扩出来的效果非常好，条带明亮无杂带，扩增不出来的隐约可见目的条带的影子，高二聚体...换了BUFFER，没有扩增出来的5个目的条带依然是模糊的影子，但是要好于...
 tawnya 2012-03-29 12:59
分子生物 寻找好心人，帮帮我，关于引物以及PCR的问题！
最近的实验相当不顺，PCR老是扩不出目的基因...RNA提取好之后直接反转录，用内参和设计的引物来PCR，内参可以扩出来，但是设计的引物却没有扩出条带，退火温度我用55度和50度都试了，但还是...
 xuzhu598 2012-03-09 12:07
生物科学 【分享】【大全】看了一些PCR的资料，不知道这些有人用得上不
每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。到达平台期(Plateau)所需循环次数取决于样品中模板...此步若不能使靶基因模板或PCR产物完全变性，就会导致PCR失败。...
 gl19860312 2011-12-15 10:25
分子生物 【资料】PCR引物设计的11条黄金法则，及常用软件使用介绍
如和你的目标序列之外的序列相同的序列，则可能扩出其他序列的产物，那么这个引物的特异性就很差...好的引物设计可以避免背景和非特异产物的产生，甚至在RNA-PCR中也能识别cDNA或基因组模板。...
 xjtuwgz 2011-09-26 10:11
分子生物 【专题】PCR实验技术指南
a)该目的序列内部不得含有相同的酶切位点，在引物发出后才发现错误的事情本人就干过，在论坛上也能看到这样的粗心人。这样的错误会给将来的...P不出东西的时候不妨先考虑：模板有没有问题？...
 qingfengwu 2009-12-25 12:18
分子生物 【分享】PCR引物设计的11条黄金法则【转载】
引物3′端错配时，不同碱基引发效率存在着很大的差异，当末位的碱基为A时，即使在错配的情况下，也能有引发链的合成，而当末位链...如和你的目标序列之外的序列相同的序列，则可能扩出其他序列...
 經天 2009-11-29 11:00