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半定量PCR 已有3人参与
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在做半定量PCR，是应该先用内参调cdna浓度吧，我都稀释了100倍了，有的还亮的不得了，我的循环数是30。同学建议可以用28循环试试，那这样会不会影响后期平台期的查找阿。不过，这个应该先找平台期确定循环参数呢还是要先用内参调浓度阿…… 各位大神求指点阿 发自小木虫Android客户端 |
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【答案】应助回帖
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-25 22:39:12
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-25 22:39:12
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一般的目的基因我们设定它们的最佳循环数在25到35之间。因此，我认为，您可以先用25循环试一次，若依旧很亮，就调节DNA浓度，直至最佳循环数处于25至35之间。 置于稀释浓度，有两点建议：1 可在反转DNA前对RNA的浓度进行控制，我们实验室采用1ugRNA对应20倍ul的体系。2 无需在乎稀释倍数，只要最后保证每组DNA的浓度相等即可 建议采用第一种 对于最佳循环数的测定：配相同PCR转体系6管，循环数分别为25，27,29,31，33,35 其余条件全部相同，在同一块胶上 一起跑胶。照胶时会发现条带有一个逐渐增量至不再增量的过程（即既是循环数增加，但条带亮度是一样的），这个亮度就是平台期，此时我们取亮度刚刚出现的条带，然后为确保每次都有条带出现，正式试验时在这个循环数上加2即可。 |
2楼2016-02-25 19:57:59
3楼2016-02-25 20:09:24
4楼2016-02-28 16:32:36
5楼2019-01-31 10:40:42