| 查看: 1393 | 回复: 4 | ||
[求助]
半定量PCR 已有3人参与
|
|
在做半定量PCR，是应该先用内参调cdna浓度吧，我都稀释了100倍了，有的还亮的不得了，我的循环数是30。同学建议可以用28循环试试，那这样会不会影响后期平台期的查找阿。不过，这个应该先找平台期确定循环参数呢还是要先用内参调浓度阿…… 各位大神求指点阿 发自小木虫Android客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
伊曲莫德（Etrasimod）从“肠道免疫失控”到精准靶向干预
已经有1人回复
-
西达本胺：创新HDAC抑制剂的抗肿瘤之路
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有137人回复
-
金色抗生素单硫酸卡那霉素的物化性质、制备与前景
已经有0人回复
-
解密度鲁特韦——新一代HIV整合酶抑制剂的化学、药理与产业化图景
已经有0人回复
-
左炔诺孕酮从沃氏氧化物到炔基化反应的工艺迭代与靶点解析
已经有0人回复
-
“关闭瘙痒信号”的多肽地非法林醋酸盐全解析
已经有1人回复
-
Tosylate-DPA-714介导¹⁸F-DPA-714 PET成像的前沿进展
已经有0人回复
-
I-BRD9: BRD9溴结构域化学探针，BET选择性>700倍
已经有0人回复
-
莫那利珠单抗阻断NKG2A/HLA-E抑制通路 | Biochempartner
已经有0人回复
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-25 22:39:12
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2016-02-25 22:39:12
|
一般的目的基因我们设定它们的最佳循环数在25到35之间。因此，我认为，您可以先用25循环试一次，若依旧很亮，就调节DNA浓度，直至最佳循环数处于25至35之间。 置于稀释浓度，有两点建议：1 可在反转DNA前对RNA的浓度进行控制，我们实验室采用1ugRNA对应20倍ul的体系。2 无需在乎稀释倍数，只要最后保证每组DNA的浓度相等即可 建议采用第一种 对于最佳循环数的测定：配相同PCR转体系6管，循环数分别为25，27,29,31，33,35 其余条件全部相同，在同一块胶上 一起跑胶。照胶时会发现条带有一个逐渐增量至不再增量的过程（即既是循环数增加，但条带亮度是一样的），这个亮度就是平台期，此时我们取亮度刚刚出现的条带，然后为确保每次都有条带出现，正式试验时在这个循环数上加2即可。 |
2楼2016-02-25 19:57:59
3楼2016-02-25 20:09:24
4楼2016-02-28 16:32:36
5楼2019-01-31 10:40:42