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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 求助细胞冻存与复苏~
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邸羿

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助细胞冻存与复苏~ 已有2人参与

请教各位大神两个问题：
1.细胞冻存时一般是把常温下的细胞放入冻存盒再放入-80，我是新手，那天先把细胞4度放了10分钟，又把细胞放到-20半个小时，再放入常温下的冻存盒最后放入-80过夜，请问我这画蛇添足的操作会对细胞产生影响吗？影响大吗？（哭）
2.我有一株细胞很少，只有5cm皿的20~30%，请问复苏时不离心可以吗？或者怎么避免损失？谢谢！！
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1楼 2016-02-05 11:35:39
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jyifan

木虫 (小有名气)
有一定影响，具体多大要自己评估

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勤勉、坚持
2楼2016-02-05 16:22:21
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jyifan

木虫 (小有名气)
复苏离心不离心，看品种吧，我做过10多个，没发现有影响的

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勤勉、坚持
3楼2016-02-05 16:24:37
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匿名

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4楼2016-02-06 01:51:45
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匿名

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5楼2016-02-06 03:13:09
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王雪源

木虫 (初入文坛)

随遇而安
冻存盒里加的是异丙醇，能达到冻存细胞降温速度要求，一般你把细胞直接放常温冻存盒再放-80过夜就可以了。从-20把细胞拿出来放到常温冻存盒，细胞本来结有冰晶，你再放到常温，等冻存盒温度降下来之前细胞就温度又上来了。对细胞肯定有影响。如果是贴壁细胞，细胞少的话可以直接铺，多加培养基把DMSO稀释，等到细胞贴壁可以平缓的换液，注意这时候细胞贴壁不牢，动作要轻。我这么做过，问题不大，不知道你的细胞品种可以不可以。

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随遇而安
6楼2016-02-06 10:40:12
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邸羿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by pf790352975 at 2016-02-06 03:13:09
不好意思 应该是DMSO    刚才写错了抱歉哈

请问我那样冻存影响大吗？比起直接扔到-80呢？
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7楼2016-02-06 11:19:20
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邸羿

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 王雪源 at 2016-02-06 10:40:12
冻存盒里加的是异丙醇，能达到冻存细胞降温速度要求，一般你把细胞直接放常温冻存盒再放-80过夜就可以了。从-20把细胞拿出来放到常温冻存盒，细胞本来结有冰晶，你再放到常温，等冻存盒温度降下来之前细胞就温度又上 ...

请问我那样冻存影响大吗？比起直接扔到-80呢？
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8楼2016-02-06 11:22:30
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王雪源

木虫 (初入文坛)

随遇而安

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by 邸羿 at 2016-02-06 11:22:30
请问我那样冻存影响大吗？比起直接扔到-80呢？...

我也不用冻存盒冻过，4度半小时，-20度1-2小时，这时候冻存管里应该冰了，再放到-80，也可以用棉花包着放，过夜后放液氮。也没事。

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随遇而安
9楼2016-02-06 11:34:13
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王雪源

木虫 (初入文坛)

随遇而安

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
邸羿: 金币+7, ★有帮助 2016-02-06 11:52:45
引用回帖:
9楼: Originally posted by 王雪源 at 2016-02-06 11:34:13
我也不用冻存盒冻过，4度半小时，-20度1-2小时，这时候冻存管里应该冰了，再放到-80，也可以用棉花包着放，过夜后放液氮。也没事。
...

你那样的结果我也不好说，得看你复苏能不能复出来，不要把细胞直接扔-80

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随遇而安
10楼2016-02-06 11:35:39
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