| 查看: 2192 | 回复: 10 | |||
[求助]
求助 关于PCR反应中各反应期效率关系 已有1人参与
|
|||
|
主要是需要了解 分别在指数期和平台期：多重PCR反应中 dNtp、酶、模板、引物等随着时间增加哪个对反应效率影响最大 他们相互之间呈现一个什么关系？ 各位大神帮帮忙 在此谢过 如果不清楚我的问题可以回帖我细说 谢谢！  （最好推荐给我相关文献 中文外文都行） |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有56人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有1人回复
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
首先，引物肯定是过量的，即便在PCR反应后期。 其次，dNTP也是过量的。 第三有点复杂，就是模板的量，模板分为两种，第一种是反应起始您添加的模板量，这个可控。第二种是随着反应循环积累起来的新合成的模板量，这个跟酶、引物、dNTP均有很大关系。 （这里插一点，如果其实模板量很大，也会造成反应后期引物，dNTP不够的情况） 第四就是酶，虽然现在使用的都是耐热的酶，但也不能保证所有的酶都在温度反复变化中存活下来，每个循环中，必然有一部分酶壮烈牺牲（失活）…… 而且对于多重PCR，酶、dNTP都是制约因素。 如果假设扩增效率为100%，反应所需原料都足够，那么可以粗略认为产物的摩尔数跟引物的摩尔数是差不多的。 |
2楼2016-02-03 09:30:12
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
|
我粗略算了一下，不知道对不对： 模板：以pUC18质粒为例，加1ng = 0.57×10^-15 mol. 扩增产物：1000bp（这个与dNTP用量有关系） 引物：500 pmol，即 5×10^-7 mol. dNTP：4 × 2 × 10^-4 mol=8 × 10^-4 mol . 若引物、dNTP、酶都足够，效率为100%，反应循环30次，则扩增2×10^9拷贝 也就是0.57× 10^-15 × 2×10^9 ≈ 1 × 10^-6个产物 那么需要1 × 10^-6个引物，需要dNTP 1 × 10^-6 × 2 × 1000 = 2 ×10^-3个。 对比发现：引物不够了！dNTP也捉襟见肘！ 但这仅仅是理论计算，与实际有所不同的，实际模板可能比这个少，PCR酶的反应效率也不会达到100%，所以不会有这么多产物的。不知道我算的对不对…… |
3楼2016-02-03 10:38:31
4楼2016-02-03 11:24:07
5楼2016-02-03 11:48:48
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
6楼2016-02-03 12:05:28
7楼2016-02-03 12:56:19
8楼2016-02-03 13:31:54
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
9楼2016-02-03 13:41:39
10楼2016-02-03 13:45:17
