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redking2012木虫 (正式写手)
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荧光蛋白报告基因在基因组编辑中的作用 已有1人参与
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最近在想一个问题关于怎么更加高效的使用荧光蛋白报告基因来更快的筛选出编辑正确的细胞。通常我们在细胞内过表达zinc finger或者talen 和crispr cas9，以及靶标导向的元件，通常我们可以给细胞提供一个供体质粒：带有两个同源臂，同源臂上带有想要引入的突变，同源臂之间带有荧光蛋白标签。通过同源臂重组，突变被引入基因组，同时荧光蛋白报告基因也被引入基因组，通过流式细胞筛选带有荧光的单细胞，这种方法可以快速富集编辑成功的细胞。那么我们可不可以同时构建两个供体质粒，分别带有不同荧光，流式细胞筛选带有两种荧光的细胞，这种细胞理论上应该是两个拷贝都被成功的编辑了。 另外我想问问大家，过多的荧光筛选对细胞有什么伤害，这种筛选出来的细胞发表论文的时候，审稿人会不会怀疑该方法的安全性？ 发自小木虫IOS客户端 |
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