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关于药典蕲蛇特异性PCR扩增的问题 已有3人参与
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模板DNA提取 取本品0.5g，置乳钵中，加液氮适量，充分研磨使成粉末，取0.1g，置1.5ml离心管中，加入消化液275μl[细胞核裂解液200μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液50μl，蛋白酶K（20mg/ml）20μl，RNA酶溶液5μl]，在55℃水浴保温1小时，加入裂解缓冲液250μl，混匀，加到DNA纯化柱中，离心（转速为每分钟10000转）3分钟；弃去过滤液，加入洗脱液800μl[5mol/L醋酸钾溶液26μl，1mol/L Tris-盐酸溶液（pH7.5）18μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液（pH8.0）3μ1，无水乙醇480μl，灭菌双蒸水273μl]，离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3次，每次离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，再离心2分钟，将DNA纯化柱转移入另一离心管中，加入无菌双蒸水100μl，室温放置2分钟后，离心（转速为每分钟10000转）2分钟，取上清液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取蕲蛇对照药材0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。 以上为15版药典中规定的蕲蛇DNA提取的方法，可是未明确细胞核裂解液和裂解缓冲液的配制方法，求各位大神告知细胞核裂解液和裂解缓冲液的配方？？万分感谢 |
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4楼2016-01-29 14:31:57
