应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 关于药典蕲蛇特异性PCR扩增的问题
51/1返回列表
查看: 1739  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

destiny516

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于药典蕲蛇特异性PCR扩增的问题 已有3人参与

模板DNA提取  取本品0.5g，置乳钵中，加液氮适量，充分研磨使成粉末，取0.1g，置1.5ml离心管中，加入消化液275μl[细胞核裂解液200μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液50μl，蛋白酶K（20mg/ml）20μl，RNA酶溶液5μl]，在55℃水浴保温1小时，加入裂解缓冲液250μl，混匀，加到DNA纯化柱中，离心（转速为每分钟10000转）3分钟；弃去过滤液，加入洗脱液800μl[5mol/L醋酸钾溶液26μl，1mol/L Tris-盐酸溶液（pH7.5）18μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液（pH8.0）3μ1，无水乙醇480μl，灭菌双蒸水273μl]，离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3次，每次离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，再离心2分钟，将DNA纯化柱转移入另一离心管中，加入无菌双蒸水100μl，室温放置2分钟后，离心（转速为每分钟10000转）2分钟，取上清液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取蕲蛇对照药材0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。

以上为15版药典中规定的蕲蛇DNA提取的方法，可是未明确细胞核裂解液和裂解缓冲液的配制方法，求各位大神告知细胞核裂解液和裂解缓冲液的配方？？万分感谢
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-29 14:04:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

destiny516

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ssswzf at 2016-01-31 16:55:34
说实话，药典只是提供用什么方法去做实验，不可能告诉你用具体的什么试剂配制，如何提取的方法都十分详细，试想一下，如果真的是这样，那试剂盒公司还能有活路吗？药典最多也是告诉你用什么试剂盒而已，所以别费 ...

关键是药典没有写用试剂盒，涉及到实验室认证，用试剂盒可能存在风险
赞一下 回复此楼
8楼2016-02-02 11:10:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
destiny516: 金币+5, ★有帮助 2016-01-29 14:36:23
这实际上就是普通的动物基因组DNA抽提的步骤。
不知楼主是否一定要按照药典的方法来，如果不强制，买个动物基因组DNA抽提试剂盒就好了，省了配制诸多试剂的麻烦。
如果您的样品是中药，我建议您采用深加工产品DNA抽提试剂盒来做，效果会好一点。
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-29 14:11:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

destiny516

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-29 14:11:15
这实际上就是普通的动物基因组DNA抽提的步骤。
不知楼主是否一定要按照药典的方法来，如果不强制，买个动物基因组DNA抽提试剂盒就好了，省了配制诸多试剂的麻烦。
如果您的样品是中药，我建议您采用深加工产品DNA ...

我们实验室需要过CMA认证，因此必须按照药典的方法来，你有配方吗？
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-29 14:28:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by destiny516 at 2016-01-29 14:28:22
我们实验室需要过CMA认证，因此必须按照药典的方法来，你有配方吗？...

额……这个真没有……
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-29 14:31:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 4/200 2026-09-01 06:07 by o3EMxHUAQDtS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 EZ67DG6CvcKL 2026-08-31 5/250 2026-09-01 05:45 by o3EMxHUAQDtS
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 wsYGJnURYvm6 2026-08-31 3/150 2026-09-01 01:52 by o3EMxHUAQDtS
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +6 叶九微 2026-08-26 6/300 2026-08-31 23:54 by yudaoqian88
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +17 爱看书的可乐 2026-08-26 19/950 2026-08-31 21:30 by xiangy672
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +6 zhaosm1982 2026-08-27 7/350 2026-08-31 21:18 by qdxxmc
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 5/250 2026-08-31 14:40 by hahaboy
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高，自己申请怎么就这么难 +12 Kittylucky 2026-08-27 13/650 2026-08-29 00:04 by superceng
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 面上合作单位盖章 +5 ssyjh 2026-08-27 5/250 2026-08-27 20:50 by gdfollow
[基金申请] 为什么 国际(地区)合作与交流项目 没有放榜？ 10+3 majunge000 2026-08-26 11/550 2026-08-27 08:42 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 为什么国自然不能直接公布 +4 bjdxyxy 2026-08-26 4/200 2026-08-26 13:12 by qingmu1201
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭