| 查看: 1728 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
关于药典蕲蛇特异性PCR扩增的问题 已有3人参与
|
||
|
模板DNA提取 取本品0.5g，置乳钵中，加液氮适量，充分研磨使成粉末，取0.1g，置1.5ml离心管中，加入消化液275μl[细胞核裂解液200μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液50μl，蛋白酶K（20mg/ml）20μl，RNA酶溶液5μl]，在55℃水浴保温1小时，加入裂解缓冲液250μl，混匀，加到DNA纯化柱中，离心（转速为每分钟10000转）3分钟；弃去过滤液，加入洗脱液800μl[5mol/L醋酸钾溶液26μl，1mol/L Tris-盐酸溶液（pH7.5）18μl，0.5mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液（pH8.0）3μ1，无水乙醇480μl，灭菌双蒸水273μl]，离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，用上述洗脱液反复洗脱3次，每次离心（转速为每分钟10000转）1分钟；弃去过滤液，再离心2分钟，将DNA纯化柱转移入另一离心管中，加入无菌双蒸水100μl，室温放置2分钟后，离心（转速为每分钟10000转）2分钟，取上清液，作为供试品溶液，置零下20℃保存备用。另取蕲蛇对照药材0.5g，同法制成对照药材模板DNA溶液。 以上为15版药典中规定的蕲蛇DNA提取的方法，可是未明确细胞核裂解液和裂解缓冲液的配制方法，求各位大神告知细胞核裂解液和裂解缓冲液的配方？？万分感谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有280人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
说实话，药典只是提供用什么方法去做实验，不可能告诉你用具体的什么试剂配制，如何提取的方法都十分详细，试想一下，如果真的是这样，那试剂盒公司还能有活路吗？药典最多也是告诉你用什么试剂盒而已，所以别费心了...！实话实说，别往心里去 
5楼2016-01-31 16:55:34
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
2楼2016-01-29 14:11:15
3楼2016-01-29 14:28:22
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
4楼2016-01-29 14:31:57
投票:
10