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dataideng

银虫 (初入文坛)

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[交流] 有人从genomic DNA里PCR过大于8kb的长片段吗？已有7人参与

最近需要从genomic DNA里PCR一段8kb的片段，用的kit是Roche Expand™ Long Template PCR System。引物长度~21bp，退火温度比Tm低2度。其余都是按protocol设置的。但是一直没有P出来。
有人有这种从基因组PCR长片段的经验吗？感谢分享和交流。

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1楼2016-01-27 10:28:35

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dataideng

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引用回帖:

2楼: Originally posted by fjtony163 at 2016-01-28 00:38:46
我们一般是做3到4kb 考虑把初始变性时间延长到七分钟以上

但是说明书写2分钟，不敢乱改啊

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8楼2016-01-29 22:45:39

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dataideng

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引用回帖:

4楼: Originally posted by zhangyunjing at 2016-01-28 12:19:37
8 kb用长片段扩增试剂盒很容易就扩出来了，引物设计长一些，在25-30 bp左右，Tm设置在65℃，用生工的产品编号为 B639285的Long and Accurate PCR Kit，扩增过15 kb，扩增条带挺亮的

你的DNA是从血液里提的？

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9楼2016-01-29 22:46:22

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