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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 有人从genomic DNA里PCR过大于8kb的长片段吗？
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dataideng

银虫 (初入文坛)

[交流] 有人从genomic DNA里PCR过大于8kb的长片段吗？ 已有7人参与

最近需要从genomic DNA里PCR一段8kb的片段，用的kit是Roche  Expand™ Long Template PCR System。引物长度~21bp，退火温度比Tm低2度。其余都是按protocol设置的。但是一直没有P出来。
有人有这种从基因组PCR长片段的经验吗？感谢分享和交流。
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1楼 2016-01-27 10:28:35
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dataideng

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by sloop112 at 2016-01-28 09:44:35
长片段的基因克隆能够成功构建受限于多种因素，建议LZ用合成重组的方式，提高成功率

PCR之后要测序，所以最好一次出。

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11楼2016-01-29 22:48:10
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fjtony163

版主 (文坛精英)

米米

优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主优秀版主
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我们一般是做3到4kb 考虑把初始变性时间延长到七分钟以上

发自小木虫IOS客户端
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2楼2016-01-28 00:38:46
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sloop112

禁虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
3楼2016-01-28 09:44:35
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zhangyunjing

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
8 kb用长片段扩增试剂盒很容易就扩出来了，引物设计长一些，在25-30 bp左右，Tm设置在65℃，用生工的产品编号为 B639285的Long and Accurate PCR Kit，扩增过15 kb，扩增条带挺亮的
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rainwater
4楼2016-01-28 12:19:37
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