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新虫 (初入文坛)

[求助] 我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助 已有2人参与

引物之前跑能跑出来,程序也是之前试好了的。之前这个条带很好跑,结果也很清晰,但最近,它拖尾地都不能说是拖尾了,完全就是弥散。而且阴性对照不要太亮。试过换引物,换PCR仪,没大差,手上没留阳性对照。哪位能给分析下出现这种结果的可能原因?感激不尽。找不到原因我一直这么P下去,纯粹就是在浪费东西,根本就做不出来

我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助
marker左边是一直跑不出来的那个条带


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-1
以marker为边界,两份样品一起P的


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-2
左右两边重复试验


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-3
新旧引物对比,下面是旧引物


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-4
重新剪得脚趾,用的旧引物


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-5
不同引物、不同PCR仪


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阴性对照出卖了我


我都快要疯了,九个样跑了快九遍了,真心求助-7
再次不甘心地用了别人在用的引物,结果就这样了
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lizg8688

新虫 (初入文坛)

确保样品没降解,聚合酶没有失活

发自小木虫Android客户端
4楼2016-01-23 22:22:37
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普通回帖

hollyhu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-23 22:44:12
mwml用户名: 金币+1 2016-02-18 15:45:14
弱弱的说一声是不是应该换一下酶,我们就准备了好几种酶,换着用,至少用DNA polymerase,Pfu等不同的酶进行扩增。
2楼2016-01-23 21:25:56
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川大太行

金虫 (正式写手)

模板的量是不是太多了?

发自小木虫Android客户端
不惧不惑向阳而生
3楼2016-01-23 21:42:32
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原海亮

木虫 (著名写手)

天空才是极限,我有信心飞的更高!
5楼2016-01-23 22:24:52
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倩文默

新虫 (小有名气)

模板,引物会不会太多?

发自小木虫Android客户端
6楼2016-01-23 22:49:57
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)

模板的问题吧,重新换模板吧!

发自小木虫Android客户端
7楼2016-01-23 23:18:24
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家喻户晓

新虫 (小有名气)

8楼2016-01-24 00:44:53
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9楼2016-01-24 00:53:58
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mwml用户名

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lizg8688 at 2016-01-23 22:22:37
确保样品没降解,聚合酶没有失活

这两个都能确保,因为用同一个样品同一管酶扩增另一个片段是可以扩出来的

发自小木虫Android客户端
10楼2016-01-24 09:05:01
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