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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助
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新虫 (初入文坛)

[求助] 我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助 已有2人参与

引物之前跑能跑出来，程序也是之前试好了的。之前这个条带很好跑，结果也很清晰，但最近，它拖尾地都不能说是拖尾了，完全就是弥散。而且阴性对照不要太亮。试过换引物，换PCR仪，没大差，手上没留阳性对照。哪位能给分析下出现这种结果的可能原因？感激不尽。找不到原因我一直这么P下去，纯粹就是在浪费东西，根本就做不出来

我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助
marker左边是一直跑不出来的那个条带


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-1
以marker为边界，两份样品一起P的


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-2
左右两边重复试验


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-3
新旧引物对比，下面是旧引物


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-4
重新剪得脚趾，用的旧引物


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-5
不同引物、不同PCR仪


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-6
阴性对照出卖了我


我都快要疯了，九个样跑了快九遍了，真心求助-7
再次不甘心地用了别人在用的引物，结果就这样了
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1楼 2016-01-22 21:22:34
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lizg8688

新虫 (初入文坛)
确保样品没降解，聚合酶没有失活

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4楼2016-01-23 22:22:37
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普通回帖

hollyhu

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2016-01-23 22:44:12
mwml用户名: 金币+1 2016-02-18 15:45:14
弱弱的说一声是不是应该换一下酶，我们就准备了好几种酶，换着用，至少用DNA polymerase，Pfu等不同的酶进行扩增。
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2楼2016-01-23 21:25:56
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川大太行

金虫 (正式写手)
模板的量是不是太多了？

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不惧不惑向阳而生
3楼2016-01-23 21:42:32
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原海亮

木虫 (著名写手)
模板和酶的问题

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天空才是极限，我有信心飞的更高！
5楼2016-01-23 22:24:52
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倩文默

新虫 (小有名气)
模板，引物会不会太多？

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6楼2016-01-23 22:49:57
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bright8

铁杆木虫 (著名写手)
模板的问题吧，重新换模板吧！

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7楼2016-01-23 23:18:24
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家喻户晓

新虫 (小有名气)
很可能是模板问题

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8楼2016-01-24 00:44:53
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zhuuyaoo
祝福

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9楼2016-01-24 00:53:58
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新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lizg8688 at 2016-01-23 22:22:37
确保样品没降解，聚合酶没有失活

这两个都能确保，因为用同一个样品同一管酶扩增另一个片段是可以扩出来的

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10楼2016-01-24 09:05:01
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