24小时热门版块排行榜    

查看: 1711  |  回复: 11

963831239

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样用PCR法克隆一个新基因? 已有4人参与

采用PCR法从植物基因组中克隆出基因,求具体方法与步骤
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

HCD崇
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

子禾纳言

新虫 (初入文坛)

比对出比较保守序列,设计引物

发自小木虫Android客户端
5楼2016-01-20 22:08:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pengc201

禁虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
963831239: 金币+10, 有帮助 2016-01-21 11:01:21
本帖内容被屏蔽

6楼2016-01-21 00:40:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
963831239: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-22 22:28:28
同源性比对后在保守区设计引物,然后送去上海生工合成引物。引物合成完,以阳性DNA模板进行PCR扩增,扩增完若有目的条带,可以酶切后连到载体上送去测序公司测序,也可以直接将PCR产物(最好将PCR产物切胶纯化后)送去测序。
8楼2016-01-22 12:08:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sail000000

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
963831239: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-22 22:28:40
最好用相近种属的序列比对,同源性比对后在保守区设计引物,然后PCR测序,比对是否一样
保守区域如果在ORF两端就可以直接拿到编码区,如果只是中间的一个片段,想要拿到全长,就需要做3'或者5' RACE了
9楼2016-01-22 14:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
新基因!如果真是一个新基因,以前一无所知,暂时不能用PCR方法扩增。PCR的前提是要知道(或推断)其短序列!!
10楼2016-01-23 05:46:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

963831239

银虫 (小有名气)

就是新基因通过近亲物种同源比对查找到了,接下来怎么用PCR法克隆出来?
HCD崇
2楼2016-01-20 21:58:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

子禾纳言

新虫 (初入文坛)

3楼2016-01-20 22:02:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

963831239

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 子禾纳言 at 2016-01-20 22:02:41
NCBI查找

假设已经查找到了,之后怎么操作就不清楚了
HCD崇
4楼2016-01-20 22:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

963831239

银虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 子禾纳言 at 2016-01-20 22:02:41
NCBI查找

谢谢
HCD崇
7楼2016-01-21 15:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 963831239 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了,论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧,后缀研究没有意义,别浪费时间了,过好目前的每一天,不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] 面上再次挂了,太难了,躺也躺不了,倦也卷不过,小学校之殇! +23 低垂的野花 2026-07-31 31/1550 2026-08-07 12:22 by speculiar
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] 基金中了 +11 laoda193707 2026-08-06 11/550 2026-08-07 10:54 by TT和NN
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的,举个手。玩一下,释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息?这个有何含义??? +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 纯娱乐,不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息,有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 娱乐 +4 Tide man 2026-08-03 4/200 2026-08-04 11:51 by wgch518
[基金申请] 什么时候能放榜呀? +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
请填处理意见