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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 怎样用PCR法克隆一个新基因？
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963831239

银虫 (小有名气)

[求助] 怎样用PCR法克隆一个新基因？ 已有4人参与

采用PCR法从植物基因组中克隆出基因，求具体方法与步骤
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HCD崇
1楼 2016-01-20 21:38:05
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

子禾纳言

新虫 (初入文坛)
比对出比较保守序列，设计引物

发自小木虫Android客户端
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5楼2016-01-20 22:08:20
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pengc201

禁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
963831239: 金币+10, ★有帮助 2016-01-21 11:01:21
本帖内容被屏蔽
6楼2016-01-21 00:40:44
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守望海贝

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
963831239: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-22 22:28:28
同源性比对后在保守区设计引物，然后送去上海生工合成引物。引物合成完，以阳性DNA模板进行PCR扩增，扩增完若有目的条带，可以酶切后连到载体上送去测序公司测序，也可以直接将PCR产物（最好将PCR产物切胶纯化后）送去测序。
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8楼2016-01-22 12:08:09
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sail000000

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
963831239: 金币+10, ★★★很有帮助 2016-01-22 22:28:40
最好用相近种属的序列比对，同源性比对后在保守区设计引物，然后PCR测序，比对是否一样
保守区域如果在ORF两端就可以直接拿到编码区，如果只是中间的一个片段，想要拿到全长，就需要做3'或者5' RACE了
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9楼2016-01-22 14:54:54
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exon2002

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
新基因！如果真是一个新基因，以前一无所知，暂时不能用PCR方法扩增。PCR的前提是要知道（或推断）其短序列！！
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10楼2016-01-23 05:46:49
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普通回帖

963831239

银虫 (小有名气)
就是新基因通过近亲物种同源比对查找到了，接下来怎么用PCR法克隆出来？
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HCD崇
2楼2016-01-20 21:58:43
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子禾纳言

新虫 (初入文坛)
NCBI查找

发自小木虫Android客户端
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3楼2016-01-20 22:02:41
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963831239

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 子禾纳言 at 2016-01-20 22:02:41
NCBI查找

假设已经查找到了，之后怎么操作就不清楚了
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HCD崇
4楼2016-01-20 22:06:53
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963831239

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 子禾纳言 at 2016-01-20 22:02:41
NCBI查找

谢谢
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HCD崇
7楼2016-01-21 15:33:39
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