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MarchZR

银虫 (小有名气)

引用回帖:
19楼: Originally posted by 湖南戴鹏辉 at 2016-01-27 16:31:02
好的,谢谢大神...

低温诱导15度也可以尝试
21楼2016-01-28 11:39:59
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)


一般和破碎的条件没有关系,理论上可能影响而已,主要还是和你基因设计的问题,你可以重新设计。也可以尝试重新摸索表达的条件,时间、诱导剂加入点,温度等等方面进行着手就可以免去之前的基因设计了。
不过你的目的蛋白已经表达了,看你对于蛋白的要求,并不是说包涵体的蛋白不能用,我们每年都纯化百来个的包涵体蛋白。也没啥影响,你现在可以最好了解一下你用包涵体做的话有没有问题
22楼2016-02-03 10:30:10
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hc2015

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告,其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:14:13
本帖内容被屏蔽

23楼2016-02-15 11:36:10
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francstone

金虫 (小有名气)

这是包涵体,就是蛋白没有正确折叠,造成聚集后沉淀。改进方法:首选是改变buffer的条件,其次是换表达体系,比如酵母或者昆虫细胞,293细胞;最后就是分析序列,改变表达蛋白的长度

发自小木虫IOS客户端
24楼2016-02-15 20:32:56
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francstone

金虫 (小有名气)

忘了说,包涵体变复性也是个选择

发自小木虫IOS客户端
25楼2016-02-15 20:33:56
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湖南戴鹏辉

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
20楼: Originally posted by MarchZR at 2016-01-28 11:39:30
遇到包涵体的情况最先考虑的不是你破碎的哪些条件等,那都是次要的,不足以导致包涵体的形成。你现在有两条路可以选择:要不就继续纯化包涵体,最后复性得到蛋白。要不就重新的设计基因合成新的质粒,再次表达然后纯 ...

谢谢
好好生活,好好工作
26楼2016-03-11 20:18:46
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麦子果树

新虫 (小有名气)

想请教一下,这个照片是用什么照的
27楼2016-04-28 14:51:40
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chengo12c

新虫 (初入文坛)

包涵体,建议18℃诱导过夜,看看表达情况,如果还不行的话,就像上面的几位所言,8M尿素变性,再纯化,复性。至少这样获得的蛋白可以用于PULL DOWN

发自小木虫Android客户端
28楼2016-04-28 15:59:13
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chengo12c

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by 麦子果树 at 2016-04-28 14:51:40
想请教一下,这个照片是用什么照的

我觉得应该是用扫描仪扫的

发自小木虫Android客户端
29楼2016-04-28 15:59:53
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chengo12c

新虫 (初入文坛)

30楼2016-04-28 16:00:51
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