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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质纯化问题
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MarchZR

银虫 (小有名气)
引用回帖:
19楼: Originally posted by 湖南戴鹏辉 at 2016-01-27 16:31:02
好的，谢谢大神...

低温诱导15度也可以尝试
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21楼2016-01-28 11:39:59
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掌控恶魔

新虫 (小有名气)
一般和破碎的条件没有关系，理论上可能影响而已，主要还是和你基因设计的问题，你可以重新设计。也可以尝试重新摸索表达的条件，时间、诱导剂加入点，温度等等方面进行着手就可以免去之前的基因设计了。
不过你的目的蛋白已经表达了，看你对于蛋白的要求，并不是说包涵体的蛋白不能用，我们每年都纯化百来个的包涵体蛋白。也没啥影响，你现在可以最好了解一下你用包涵体做的话有没有问题
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22楼2016-02-03 10:30:10
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hc2015

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金币-20, 应助指数-1, 屏蔽内容, 违规存档, 注册商家也只能在广告区发广告，其它区发广告仍属违规 2016-05-05 22:14:13
本帖内容被屏蔽
23楼2016-02-15 11:36:10
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francstone

金虫 (小有名气)
这是包涵体，就是蛋白没有正确折叠，造成聚集后沉淀。改进方法：首选是改变buffer的条件，其次是换表达体系，比如酵母或者昆虫细胞，293细胞；最后就是分析序列，改变表达蛋白的长度

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24楼2016-02-15 20:32:56
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francstone

金虫 (小有名气)
忘了说，包涵体变复性也是个选择

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25楼2016-02-15 20:33:56
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湖南戴鹏辉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
20楼: Originally posted by MarchZR at 2016-01-28 11:39:30
遇到包涵体的情况最先考虑的不是你破碎的哪些条件等，那都是次要的，不足以导致包涵体的形成。你现在有两条路可以选择：要不就继续纯化包涵体，最后复性得到蛋白。要不就重新的设计基因合成新的质粒，再次表达然后纯 ...

谢谢
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好好生活，好好工作
26楼2016-03-11 20:18:46
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麦子果树

新虫 (小有名气)
想请教一下，这个照片是用什么照的
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27楼2016-04-28 14:51:40
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chengo12c

新虫 (初入文坛)
包涵体，建议18℃诱导过夜，看看表达情况，如果还不行的话，就像上面的几位所言，8M尿素变性，再纯化，复性。至少这样获得的蛋白可以用于PULL DOWN

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28楼2016-04-28 15:59:13
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chengo12c

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
27楼: Originally posted by 麦子果树 at 2016-04-28 14:51:40
想请教一下，这个照片是用什么照的

我觉得应该是用扫描仪扫的

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29楼2016-04-28 15:59:53
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chengo12c

新虫 (初入文坛)
对了，有个BL21

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30楼2016-04-28 16:00:51
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