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湖南戴鹏辉

新虫 (初入文坛)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 11
散金: 5
帖子: 31
在线: 6.6小时
虫号: 3635486
注册: 2015-01-08
性别: GG
专业: 蛋白质组学

[求助] 蛋白质纯化问题已有9人参与

各位大神，我做了蛋白质的原核表达实验，能清晰的看到目的蛋白质表达了（载体是PET-28a,宿主是BL21（DE3）），但是我后面做蛋白质纯化实验的时候不能纯化到蛋白。我的超声波破碎细胞的条件是：400W，5S破碎，5S停止，30分钟，后面分别SDS-PAGE检测上清液和沉淀，发现上清液没有纯化到我的蛋白，蛋白都在沉淀里面了，条带特别明显，不知道怎么回事？是不是细胞没有破碎完全呢？怎么样才能解决这个问题？求大神指点，相互交流。谢谢！

IMG_20160108_170606.jpg

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好好生活，好好工作

1楼 2016-01-18 09:33:41

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

掌控恶魔

新虫 (小有名气)

应助: 16 (小学生)
金币: 57.6
红花: 3
帖子: 97
在线: 35.5小时
虫号: 4390638
注册: 2016-02-01

一般和破碎的条件没有关系，理论上可能影响而已，主要还是和你基因设计的问题，你可以重新设计。也可以尝试重新摸索表达的条件，时间、诱导剂加入点，温度等等方面进行着手就可以免去之前的基因设计了。
不过你的目的蛋白已经表达了，看你对于蛋白的要求，并不是说包涵体的蛋白不能用，我们每年都纯化百来个的包涵体蛋白。也没啥影响，你现在可以最好了解一下你用包涵体做的话有没有问题