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蛋白质纯化问题 已有9人参与
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各位大神，我做了蛋白质的原核表达实验，能清晰的看到目的蛋白质表达了（载体是PET-28a,宿主是BL21（DE3）），但是我后面做蛋白质纯化实验的时候不能纯化到蛋白。我的超声波破碎细胞的条件是：400W，5S破碎，5S停止，30分钟，后面分别SDS-PAGE检测上清液和沉淀，发现上清液没有纯化到我的蛋白，蛋白都在沉淀里面了，条带特别明显，不知道怎么回事？是不是细胞没有破碎完全呢？怎么样才能解决这个问题？求大神指点，相互交流。谢谢！ IMG_20160108_170606.jpg |
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包涵体，建议18℃诱导过夜，看看表达情况，如果还不行的话，就像上面的几位所言，8M尿素变性，再纯化，复性。至少这样获得的蛋白可以用于PULL DOWN 发自小木虫Android客户端 |
28楼2016-04-28 15:59:13
a86052
金虫 (正式写手)
- 应助: 151 (高中生)
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- 专业: 生物大分子结构与功能
2楼2016-01-18 10:04:38
3楼2016-01-18 10:17:14
hc-material
专家顾问 (职业作家)
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- 专业: 核技术及其应用
- 管辖: 生物科学
4楼2016-01-18 10:31:39
