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蛋白质纯化问题 已有9人参与
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各位大神，我做了蛋白质的原核表达实验，能清晰的看到目的蛋白质表达了（载体是PET-28a,宿主是BL21（DE3）），但是我后面做蛋白质纯化实验的时候不能纯化到蛋白。我的超声波破碎细胞的条件是：400W，5S破碎，5S停止，30分钟，后面分别SDS-PAGE检测上清液和沉淀，发现上清液没有纯化到我的蛋白，蛋白都在沉淀里面了，条带特别明显，不知道怎么回事？是不是细胞没有破碎完全呢？怎么样才能解决这个问题？求大神指点，相互交流。谢谢！ IMG_20160108_170606.jpg |
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francstone
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这是包涵体，就是蛋白没有正确折叠，造成聚集后沉淀。改进方法：首选是改变buffer的条件，其次是换表达体系，比如酵母或者昆虫细胞，293细胞；最后就是分析序列，改变表达蛋白的长度 发自小木虫IOS客户端 |
24楼2016-02-15 20:32:56
a86052
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2楼2016-01-18 10:04:38
3楼2016-01-18 10:17:14
hc-material
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4楼2016-01-18 10:31:39
6