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紫萸香慢001

新虫 (小有名气)

[交流] 求教求教:Taq酶作用???有没有人告诉我

Taq酶有没有逆转录酶的作用,比如我拿mRNA加入Taq酶,最终能合成cDNA吗。

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dadhz

铁虫 (初入文坛)


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楼主,看完你的描述,我的结论是,有百分之九十九可能性,你的mRNA中有DNA污染。
买个好一点的DNase I, 加到mRNA中,按照说明书指导的条件,彻底消化掉DNA,之后再扩增看看,还有没有条带。

至于taq酶有没有反转录活性,你如果有兴趣的话,可以换个其他的pcr高保真酶,替代掉taq酶,看看是不是仍旧能p出东西,依旧能扩增出条带的话,那是不是更加证明了DNA的污染?

补一句,你说的文献报道的taq酶的反转录活性,是在什么样的条件下?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
15楼2016-01-17 18:46:33
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南有乔木张恺

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
当然不可以。反转录酶是另一种

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2楼2016-01-16 23:07:31
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原来,是这样

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
没有用的。。。去买个反转录试剂盒,反转录cDNA不仅仅需要逆转录酶,还需要在反转录之前消化一下你提取的RNA里面的DNA,这样弄出来的cDNA质量才高。

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3楼2016-01-16 23:11:30
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xiangyingliu

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
去买个反转录试剂盒弄,

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4楼2016-01-16 23:13:50
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