24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1401  |  回复: 9

tgifi

新虫 (小有名气)

[求助] 求解pcr模板2.7k,P两端或中间一部分可以出来,p全长时候只能出来800bp.怎么解救 已有3人参与

如题,求大神帮忙(≧▽≦)

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tedaluobo

金虫 (小有名气)

重新设计引物,扩增比目的片段大一些,引物设计位置在promoter和终止子后,克隆成功后,再用你之前设计的引物扩,就能得到目的序列了。
楼主扩过中间片段,可以尝试目的序列分成几段,然后设计一个特殊的引物,用overlap PCR试试

发自小木虫Android客户端
追云沐雨
2楼2016-01-15 13:08:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tgifi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tedaluobo at 2016-01-15 13:08:34
重新设计引物,扩增比目的片段大一些,引物设计位置在promoter和终止子后,克隆成功后,再用你之前设计的引物扩,就能得到目的序列了。
楼主扩过中间片段,可以尝试目的序列分成几段,然后设计一个特殊的引物,用ov ...

这个就是overpcr来的,再用它做模板就有杂带了

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-15 15:51:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想天行

木虫 (职业作家)

4楼2016-01-15 15:53:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

梦想天行

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
tgifi: 金币+5 2016-01-15 15:57:29
楼主你的问题我也正碰到,好烦心啊

发自小木虫Android客户端
5楼2016-01-15 15:56:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

3306549

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
检查序列,重新设计引物
2700bp延伸至少3min吧
6楼2016-01-15 18:53:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
换酶,或者touchdown, 10K的扩增都已经解决了,,,酶就不给其它公司广告了
行至水穷处,坐看云起时
7楼2016-01-16 17:18:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jackyoung

新虫 (正式写手)

两端和中间括增出来的确定对吗?已知序列还是怎么?建议如下:
1.通过各种数据库多收集信息,包括优化克隆策略(尤其是引物设计)
2.实验需要重复,比如重新制备模板,优化PCR条件(稀释后续PCR模板,增加overlap步骤的梯度设置等)

发自小木虫Android客户端
CestLaVie
8楼2016-01-18 09:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tgifi

新虫 (小有名气)

模板是已知序列,之前扩增的没有测序,只是跑了一下胶,发现是对的

发自小木虫Android客户端
9楼2016-01-18 23:02:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tgifi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
7楼: Originally posted by pennchem at 2016-01-16 17:18:40
换酶,或者touchdown, 10K的扩增都已经解决了,,,酶就不给其它公司广告了

酶应该没有问题

发自小木虫Android客户端
10楼2016-01-18 23:03:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 tgifi 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 266分,求材料冶金能源化工等调剂 +5 哇呼哼呼哼 2026-03-27 7/350 2026-03-27 21:41 by lbsjt
[考研] 277跪求调剂 +5 1915668 2026-03-27 8/400 2026-03-27 19:53 by WYUMater
[考研] 求调剂 +4 零八# 2026-03-27 4/200 2026-03-27 18:07 by yu221
[考研] 求调剂推荐 材料 304 +14 荷包蛋hyj 2026-03-26 14/700 2026-03-27 17:49 by kiokin
[考研] 一志愿北化085600材料专硕275|有文章专利|求调剂 +3 Micky11223 2026-03-25 3/150 2026-03-27 14:52 by 醉在风里
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 考研化学308分求调剂 +10 你好明天你好 2026-03-23 12/600 2026-03-27 14:43 by shangxh
[考研] 321求调剂 +4 璞玉~~ 2026-03-25 4/200 2026-03-27 11:41 by sanrepian
[考研] 334求调剂 +3 雨清天晴 2026-03-21 3/150 2026-03-27 11:30 by 不吃魚的貓
[考研] 333求调剂 +3 question挽风 2026-03-23 3/150 2026-03-27 11:29 by 不吃魚的貓
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 0703化学/290求调剂/本科经历丰富/工科也可 +7 丹青奶盖 2026-03-26 8/400 2026-03-27 11:24 by 丹青奶盖
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 359求调剂 +4 王了个楠 2026-03-25 4/200 2026-03-27 08:43 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +6 Koxui 2026-03-24 7/350 2026-03-26 15:37 by 无际的草原
[考研] 一志愿天津大学339材料与化工求调剂 +3 江往卖鱼 2026-03-26 3/150 2026-03-26 09:42 by 王小欠i
[考研] 一志愿中南大学化学学硕0703总分337求调剂 +7 niko- 2026-03-22 7/350 2026-03-25 20:14 by qingfeng258
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 300求调剂,材料科学英一数二 +5 leaflight 2026-03-24 5/250 2026-03-24 16:25 by laoshidan
信息提示
请填处理意见