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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tgifi

新虫 (小有名气)

[求助] 求解pcr模板2.7k,P两端或中间一部分可以出来,p全长时候只能出来800bp.怎么解救 已有3人参与

如题,求大神帮忙(≧▽≦)

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jackyoung

新虫 (正式写手)

两端和中间括增出来的确定对吗?已知序列还是怎么?建议如下:
1.通过各种数据库多收集信息,包括优化克隆策略(尤其是引物设计)
2.实验需要重复,比如重新制备模板,优化PCR条件(稀释后续PCR模板,增加overlap步骤的梯度设置等)

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CestLaVie
8楼2016-01-18 09:01:38
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tedaluobo

金虫 (小有名气)

重新设计引物,扩增比目的片段大一些,引物设计位置在promoter和终止子后,克隆成功后,再用你之前设计的引物扩,就能得到目的序列了。
楼主扩过中间片段,可以尝试目的序列分成几段,然后设计一个特殊的引物,用overlap PCR试试

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追云沐雨
2楼2016-01-15 13:08:34
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tgifi

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by tedaluobo at 2016-01-15 13:08:34
重新设计引物,扩增比目的片段大一些,引物设计位置在promoter和终止子后,克隆成功后,再用你之前设计的引物扩,就能得到目的序列了。
楼主扩过中间片段,可以尝试目的序列分成几段,然后设计一个特殊的引物,用ov ...

这个就是overpcr来的,再用它做模板就有杂带了

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3楼2016-01-15 15:51:06
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梦想天行

木虫 (职业作家)

4楼2016-01-15 15:53:03
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