| 查看: 2962 | 回复: 9 | ||
wj2423311236银虫 (小有名气)
|
[求助]
关于宝生物xho1酶的连接问题 已有2人参与
|
| 最近在做双酶切后的连接，连续两次了做不出来，使用的酶是bamh1和xho1，其中xho1的说明书上说要用平末端的连接条件，可是bamh1却又要求黏末端的连接条件。现在很纠结到底用那个条件。还有平末端的连接条件是什么？新手表示很困扰啊。用的酶是宝生物的，载体是pet28a。 |
回复此楼» 猜你喜欢
筑牢营养安全线：以精准检测，护健康基石
已经有0人回复
-
推荐一些20种氨基酸检测的实际应用案例
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有94人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
gnice
金虫 (正式写手)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 1563.9
- 散金: 5
- 红花: 3
- 帖子: 322
- 在线: 154.8小时
- 虫号: 43496
- 注册: 2004-04-10
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2016-01-13 18:03:24
wj2423311236
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 675.5
- 帖子: 73
- 在线: 20.5小时
- 虫号: 4215163
- 注册: 2015-11-12
- 性别: GG
- 专业: 免疫反应相关因子与疾病
3楼2016-01-13 18:19:06
wx1308897716
木虫 (小有名气)
神虫
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3176.4
- 散金: 50
- 帖子: 100
- 在线: 136.6小时
- 虫号: 2806100
- 注册: 2013-11-16
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
4楼2016-01-13 18:51:48
wj2423311236
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 675.5
- 帖子: 73
- 在线: 20.5小时
- 虫号: 4215163
- 注册: 2015-11-12
- 性别: GG
- 专业: 免疫反应相关因子与疾病
5楼2016-01-13 19:18:53
lifechuteng
新虫 (小有名气)
- 应助: 62 (初中生)
- 金币: 504.5
- 红花: 12
- 帖子: 143
- 在线: 38.5小时
- 虫号: 3948241
- 注册: 2015-07-01
- 专业: 生物物理、生物化学与分子
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
您可以先将PCR产物连T载体（taq）或者平末端载体（pfu），抽提质粒后，再用这两个酶进行双酶切， 之后电泳回收目的片段，这样能够保证回收到的片段一定是有粘性末端的。连接成功率也会高很多。 若您直接将PCR产物进行酶切，很难保证片段百分百被酶切。并且限制性内切酶在DNA末端的酶切效率本身就很低，这种情况必须要添加保护碱基的。 若这两种酶实在不适合双酶切，也可以采用分步酶切法，即先单酶切，之后进行产物纯化，然后再进行另外一个酶切，之后再纯化，这样的好处是每一次酶切都是相应内切酶的最佳反应环境，但有致命缺点：经过多次纯化后的DNA片段浓度会很低。 |
6楼2016-01-14 12:48:26
wj2423311236
银虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 675.5
- 帖子: 73
- 在线: 20.5小时
- 虫号: 4215163
- 注册: 2015-11-12
- 性别: GG
- 专业: 免疫反应相关因子与疾病
7楼2016-01-14 17:37:45
8楼2016-01-27 12:03:45
|
本帖内容被屏蔽 |
9楼2020-12-29 11:15:46
10楼2020-12-31 18:18:58