应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 关于宝生物xho1酶的连接问题
101/1返回列表
查看: 3382  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

wj2423311236

银虫 (小有名气)

[求助] 关于宝生物xho1酶的连接问题 已有2人参与

最近在做双酶切后的连接，连续两次了做不出来，使用的酶是bamh1和xho1，其中xho1的说明书上说要用平末端的连接条件，可是bamh1却又要求黏末端的连接条件。现在很纠结到底用那个条件。还有平末端的连接条件是什么？新手表示很困扰啊。用的酶是宝生物的，载体是pet28a。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2016-01-13 17:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gnice

金虫 (正式写手)
做过很多，常规条件就行。很好连

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
2楼2016-01-13 18:03:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wj2423311236

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gnice at 2016-01-13 18:03:24
做过很多，常规条件就行。很好连

可是我两次都没做出来啊

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
3楼2016-01-13 18:19:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是要看下酶切可有问题，一般连接很少出问题
赞一下 回复此楼
4楼2016-01-13 18:51:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wj2423311236

银虫 (小有名气)
酶切对照上什么也没长

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
5楼2016-01-13 19:18:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lifechuteng

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
您可以先将PCR产物连T载体（taq）或者平末端载体（pfu），抽提质粒后，再用这两个酶进行双酶切，
之后电泳回收目的片段，这样能够保证回收到的片段一定是有粘性末端的。连接成功率也会高很多。

若您直接将PCR产物进行酶切，很难保证片段百分百被酶切。并且限制性内切酶在DNA末端的酶切效率本身就很低，这种情况必须要添加保护碱基的。

若这两种酶实在不适合双酶切，也可以采用分步酶切法，即先单酶切，之后进行产物纯化，然后再进行另外一个酶切，之后再纯化，这样的好处是每一次酶切都是相应内切酶的最佳反应环境，但有致命缺点：经过多次纯化后的DNA片段浓度会很低。
赞一下 回复此楼
6楼2016-01-14 12:48:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wj2423311236

银虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-14 12:48:26
您可以先将PCR产物连T载体（taq）或者平末端载体（pfu），抽提质粒后，再用这两个酶进行双酶切，
之后电泳回收目的片段，这样能够保证回收到的片段一定是有粘性末端的。连接成功率也会高很多。

若您直接将PCR产 ...

非常感谢，我试试

发自小木虫Android客户端
回复此楼
7楼2016-01-14 17:37:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LQF134

新虫 (初入文坛)
能连的，PCR后先提质粒对照再做双酶切
赞一下 回复此楼
8楼2016-01-27 12:03:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

JH5HJ

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
9楼2020-12-29 11:15:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

犹怜草木青

木虫 (职业作家)

热心群众铁柱儿
这种克隆方式已经属于旧技术了，你可以试试同源重组的方式连接。对酶切位点没有要求，对片段也没有要求。能一次重组上去多个片段。
只需要设计引物的时候价格同源臂就行了。
现在这是最方便的技术了。有兴趣的话自己就去找找相关技术视频看看。
赞一下 回复此楼
铁柱儿是个温柔的姐姐
10楼2020-12-31 18:18:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 wj2423311236 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 要骂人了，新模版改版就是要淡化问题凝练这种虚的东西，结果有个评委还在说凝练得不够 +6 瞬息宇宙 2026-08-31 9/450 2026-09-02 10:25 by iaeyuan
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +17 晴天加油 2026-08-26 19/950 2026-09-02 10:07 by 奶奶的心意
[基金申请] 科研人应该花精力去思考如何解决问题，而不是去凝练问题 +3 瞬息宇宙 2026-09-01 5/250 2026-09-02 08:01 by anjeeshine
[文学芳草园] 梦想 +5 myrtle 2026-08-26 8/400 2026-09-02 02:42 by Leogzhya
[基金申请] 面上合作单位盖章 +6 ssyjh 2026-08-27 9/450 2026-09-01 20:01 by huagongfeihu
[基金申请] 面上函评意见出来了，像什么等级？ 20+4 Tsingking1 2026-08-27 17/850 2026-09-01 19:51 by 超级无敌华子
[论文投稿] 小白求助 投论文要求的highlights应该如何写 5+3 l1963982152 2026-08-29 4/200 2026-09-01 09:04 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +6 yuleib84 2026-08-26 7/350 2026-08-31 19:46 by 鱼翔浅底1
[基金申请] 面上意见出来了 +12 黄鸟于飞Chao 2026-08-29 23/1150 2026-08-31 18:57 by 黄鸟于飞Chao
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +7 349506619 2026-08-28 7/350 2026-08-31 13:39 by 冼亮淀粉酶
[基金申请] 29号明天会评吗 +4 笨笨唐 2026-08-28 4/200 2026-08-31 09:30 by huixian257
[基金申请] 基金不中，共勉 +12 eulota 2026-08-26 12/600 2026-08-31 08:42 by ZJTJZ
[基金申请] 为什么到现在没收到通知？ +5 tannykie 2026-08-29 5/250 2026-08-30 21:05 by purplejack
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +7 德尚中行 2026-08-27 8/400 2026-08-30 20:52 by purplejack
[考博] 找导师 +6 yuanjiabao 2026-08-29 7/350 2026-08-30 14:40 by 生科新手
[基金申请] 我就是申请一个面上项目而已，这评审意见是按照杰青的条件评的吧？ +6 gouxfjh 2026-08-28 11/550 2026-08-30 07:57 by gouxfjh
[基金申请] 2026年叶企孙基金 +4 bud_bud 2026-08-27 7/350 2026-08-29 07:23 by foolishmani
[基金申请] 基金系统什么内容也没有 30+4 winsaint 2026-08-27 9/450 2026-08-28 11:06 by maolC
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭