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wj2423311236

银虫 (小有名气)

[求助] 关于宝生物xho1酶的连接问题 已有2人参与

最近在做双酶切后的连接,连续两次了做不出来,使用的酶是bamh1和xho1,其中xho1的说明书上说要用平末端的连接条件,可是bamh1却又要求黏末端的连接条件。现在很纠结到底用那个条件。还有平末端的连接条件是什么?新手表示很困扰啊。用的酶是宝生物的,载体是pet28a。
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wj2423311236

银虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by lifechuteng at 2016-01-14 12:48:26
您可以先将PCR产物连T载体(taq)或者平末端载体(pfu),抽提质粒后,再用这两个酶进行双酶切,
之后电泳回收目的片段,这样能够保证回收到的片段一定是有粘性末端的。连接成功率也会高很多。

若您直接将PCR产 ...

非常感谢,我试试

发自小木虫Android客户端
7楼2016-01-14 17:37:45
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查看全部 10 个回答

gnice

金虫 (正式写手)

做过很多,常规条件就行。很好连

发自小木虫Android客户端
2楼2016-01-13 18:03:24
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wj2423311236

银虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gnice at 2016-01-13 18:03:24
做过很多,常规条件就行。很好连

可是我两次都没做出来啊

发自小木虫Android客户端
3楼2016-01-13 18:19:06
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wx1308897716

木虫 (小有名气)

神虫

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是要看下酶切可有问题,一般连接很少出问题
4楼2016-01-13 18:51:48
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